使用奧林巴斯進口顯微鏡 CX43 進行熒光轉染觀察，可按照以下步驟進行操作,，以清晰觀察到熒光轉染后的細胞狀態(tài)及熒光表達情況：

實驗準備

確保已完成細胞的熒光轉染操作,，并在合適的時間點將細胞準備好用于觀察。轉染后的細胞需在培養(yǎng)器皿（如培養(yǎng)皿,、多孔板）中培養(yǎng),，使其達到適宜觀察的狀態(tài)。

準備好顯微鏡配套的熒光濾光片組,，根據所使用的熒光標記物選擇合適的濾光片,。常見的熒光標記物有綠色熒光蛋白（GFP）、紅色熒光蛋白（RFP）等，不同的熒光蛋白需要使用對應的激發(fā)光和發(fā)射光濾光片,。

打開奧林巴斯顯微鏡 CX43 的電源,，預熱光源，讓其穩(wěn)定發(fā)光,，同時調節(jié)顯微鏡的亮度至適中水平,。

放置樣本

將含有轉染細胞的培養(yǎng)器皿小心放置在顯微鏡的載物臺上，使用載物臺上的固定裝置（如玻片夾）將其固定好,，避免在觀察過程中發(fā)生移動,。

通過載物臺的移動旋鈕，將培養(yǎng)器皿中的細胞區(qū)域移動到物鏡的正下方,，使需要觀察的部位大致處于視野中心位置,。

低倍鏡觀察定位

轉動物鏡轉換器，將低倍物鏡（如 4 倍或 10 倍）轉至工作位置,，使其對準通光孔,。

從側面注視物鏡，同時轉動粗準焦螺旋,，使載物臺緩慢上升,，直到物鏡接近培養(yǎng)器皿（注意不要讓物鏡碰到培養(yǎng)器皿，一般距離約 0.5 - 1 厘米）,。

從目鏡中觀察,，緩慢轉動粗準焦螺旋，使載物臺下降,，直到看到模糊的細胞圖像,。再轉動細準焦螺旋，使細胞圖像清晰,。

在低倍鏡下觀察整個細胞培養(yǎng)區(qū)域,，找到細胞分布較為均勻且熒光表達相對明顯的區(qū)域，將其移至視野中央,，以便后續(xù)切換高倍鏡進行詳細觀察,。

熒光觀察模式切換

確定好觀察區(qū)域后，切換顯微鏡至熒光觀察模式,。根據所使用的熒光標記物,，選擇對應的熒光濾光片組。例如,，觀察 GFP 標記的細胞,，需選擇能夠激發(fā)綠色熒光并過濾出相應發(fā)射光的濾光片組。

打開熒光光源,，調節(jié)熒光光源的強度,，避免過強的熒光導致細胞圖像過曝或熒光淬滅,，同時也要確保能夠清晰觀察到熒光信號。

高倍鏡觀察

轉動物鏡轉換器,，換用高倍物鏡（如 20 倍或 40 倍）進行更詳細的觀察,。由于高倍物鏡的工作距離較短，此時不能再使用粗準焦螺旋,，只能通過轉動細準焦螺旋來微調焦距,，使細胞和熒光圖像清晰。

在高倍鏡下仔細觀察細胞的形態(tài),、熒光的分布和強度,。注意觀察熒光是在細胞的哪個部位表達，如細胞質,、細胞核或細胞膜等,，以及熒光的表達是否均勻。同時,，觀察不同細胞之間熒光表達的差異,。

圖像采集與記錄

使用顯微鏡配備的數(shù)碼攝像頭或連接電腦的圖像采集系統(tǒng),，拍攝觀察到的細胞熒光圖像,。可以拍攝不同視野,、不同曝光時間下的圖像,，以獲取最佳的觀察效果。

在拍攝圖像時,，記錄下圖像的放大倍數(shù),、熒光濾光片組的選擇、曝光時間等參數(shù),，以便后續(xù)對圖像進行分析和對比,。

對拍攝的圖像進行標注，注明樣本的來源,、轉染的時間,、觀察的時間等信息，方便實驗數(shù)據的整理和分析,。

觀察結束與設備維護

觀察結束后,，關閉熒光光源和顯微鏡的電源。將培養(yǎng)器皿從載物臺上取下,，按照實驗室的廢棄物處理規(guī)定進行處置,。

清潔顯微鏡的載物臺、物鏡,、目鏡等部件,，去除可能殘留的細胞培養(yǎng)基或其他污染物,。將顯微鏡恢復到初始狀態(tài)，妥善保管,，定期進行維護和校準,，以確保其性能的穩(wěn)定性和觀察的準確性。