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ProteanFect Max 轉染試劑盒：提供免疫細胞高效,、低毒性的核酸轉染解決方案
產品名稱：ProteanFect Max 轉染試劑盒
規(guī)格：多種規(guī)格可選
簡介：ProteanFect Max 轉染試劑盒是全·球首·款自組裝蛋白納米顆粒核酸轉染試劑，專為原代細胞與難轉細胞系設計，能夠實現(xiàn)卓·越的外源基因遞送與表達。作為一種非病毒、非電轉,、非脂質體的轉染試劑，ProteanFect Max 能高效且低毒性地轉染 mRNA,、siRNA,、DNA 等多種核酸。該試劑操作簡便,，僅需 5-15 分鐘即可將核酸遞送至細胞內,，最快在 1 小時內觀察到 mRNA 的表達效果?！?br/>
規(guī)格：多種規(guī)格可選
簡介：ProteanFect Max 轉染試劑盒是全·球首·款自組裝蛋白納米顆粒核酸轉染試劑，專為原代細胞與難轉細胞系設計，能夠實現(xiàn)卓·越的外源基因遞送與表達。作為一種非病毒、非電轉,、非脂質體的轉染試劑，ProteanFect Max 能高效且低毒性地轉染 mRNA,、siRNA,、DNA 等多種核酸。該試劑操作簡便,，僅需 5-15 分鐘即可將核酸遞送至細胞內,，最快在 1 小時內觀察到 mRNA 的表達效果?！?br/>
產品特點與優(yōu)勢：
- 高效轉染：能夠高效轉染 mRNA,、siRNA、DNA 等多種核酸,，適用于多種細胞類型,。
- 低毒性：對細胞的損傷小，轉染后細胞狀態(tài)恢復快,。
- 操作簡便：僅需 5-15 分鐘即可完成轉染,，最快 1 小時內觀察到 mRNA 表達。
- 適用廣泛：適用于原代細胞和難轉細胞系,，如人原代 T 細胞,、Jurkat T 細胞、HepG2 細胞等,。
- 陽性對照：試劑盒包含編碼綠色熒光蛋白（EGFP）的 mRNA 和質粒 DNA,，驗證實驗操作及試劑效果。
產品應用：
- 基因表達研究：快速高效地將目標基因遞送至細胞內,，觀察基因表達效果,。
- RNA干擾研究：通過 siRNA 轉染實現(xiàn)基因沉默,，研究基因功能。
- 細胞功能研究：在原代細胞和細胞系中進行功能研究,，如細胞增殖,、凋亡、遷移等,。
儲存與運輸條件：
- 儲存條件：Reagent A 和 Reagent C 打開使用后保存于 2-8℃，Reagent B 保存于 -20℃,，避免反復凍融,。
- 運輸條件：干冰運輸，收到后應存放于 -20℃,，直至使用,。
實驗前材料準備：
- 待轉染細胞：轉染前細胞必須處于良好的生長狀態(tài)，活率＞90%,。對于原代細胞,，建議在適當活化后進行轉染。
- 推薦培養(yǎng)基：Opti-MEM 培養(yǎng)基（或無血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基/無血清 DMEM 培養(yǎng)基）,，提前預熱或恢復至室溫,。
- 其他：完·全培養(yǎng)基，無菌 EP 管,、所需轉染的核酸樣品,。
實驗操作步驟：
- 配置 ProteanFect 轉染體系：
- 在 40 µL Reagent A 中加入 0.5 µg mRNA，充分混勻,。
- 加入 1.4 μL Reagent B,，輕柔充分混勻。
- 對于原代細胞,，加入 8 μL Reagent C 混勻,。
- 細胞處理：
- 懸浮細胞：300 g 離心 5 分鐘，收集細胞沉淀,，用 Opti-MEM 重懸并洗滌,，調至 5×10? - 1×10? cells/mL 備用。
- 貼壁細胞：轉染前匯合率應保持在 50%-80%,，用 Opti-MEM 輕柔清洗細胞兩次,，加入 20 µL Opti-MEM 備用。
- 細胞轉染：
- 將配置好的 ProteanFect 轉染體系與 20 µL 細胞懸液或貼壁細胞混合均勻,。
- 37℃孵育 45-60 分鐘（細胞系）或 15-30 分鐘（原代細胞）,。
- 加入至少 200 µL 完·全培養(yǎng)基，300 g 離心 5 分鐘,，棄上清（為避免細胞損失,，無需完·全棄盡）,；對于貼壁細胞，直接棄去混合液,，補加培養(yǎng)基,。
- 加入適量完·全培養(yǎng)基，進行細胞培養(yǎng),，后續(xù)可根據(jù)實驗目的進行基因表達檢測,。
常見問題及解決方案：
- 如何提升轉染效率：
- 延長轉染時間：根據(jù)細胞狀態(tài)適當延長轉染時間。通常原代細胞不超過 1 小時,，細胞系不超過 2 小時,。
- 提升 Reagent B 用量：適當增加 Reagent B 的用量，以 96 孔板為例,，原代細胞推薦為 0.7-1.4 μL,，細胞系為 1-3 μL。
- 提升 Reagent C 用量：對于細胞系轉染,，可在體系中添加適當?shù)?Reagent C,，以 96 孔板為例，添加 8-13.5 μL,，孵育 15 分鐘,，最長不超過 45 分鐘；原代細胞則可將 Reagent C 體積增加至 13.5 μL,，孵育時間同樣不超過 45 分鐘,。
- 提升 ProteanFect 轉染量：適當增加轉染體系至初始的 1.5-2.5 倍。
- 質粒 DNA 能否用于原代細胞轉染：
- 雙鏈 DNA 轉染原代細胞可能引起一定的毒性,，例如炎癥應激,，因此需根據(jù)實驗目的謹慎選擇。以人或小鼠來源的原代 T 細胞為例,，使用質粒 DNA 轉染可能導致顯著的細胞毒性,，因此不適合此類細胞。而大多細胞系通常經過多代培養(yǎng),，能更有效地應對外源 DNA 帶來的壓力,，對雙鏈 DNA 轉染的耐受性較高，因此可以使用質粒 DNA 進行轉染,。
- 質粒 DNA 轉染要求：
- 轉染效率受 DNA 質量影響,。建議使用無內毒素試劑盒制備 DNA，并確保 OD 值在 1.7-1.9 之間,；使用無核酸酶純水將 DNA 稀釋至 0.5-2 µg/µL 的濃度,。
- 細胞系轉染前處理：
- 為獲得良好的轉染效率，建議使用活性超過 90%的細胞，可以通過臺盼藍染色測定細胞活性,。
- 不建議使用傳代次數(shù)超過 15 次的細胞進行實驗,。
- 新復蘇的細胞在轉染實驗前需傳代 2-3 次，待細胞恢復正常生長后使用,。
- 原代細胞轉染前預處理：
- 對于原代細胞,，充分活化有助于提高轉染效率，因此建議在適當活化后進行轉染,。例如,，人原代 T 細胞可使用 CD3/CD28 磁珠或抗體進行激活，激活 2-10 天內均可轉染,，其中激活 4-6 天時轉染效率zui高,。
- 關于試劑盒中陽性對照的使用建議：
- 首·次嘗試時，建議設置陽性對照組（EGFP mRNA 或 EGFP pDNA）,，以檢測實驗操作和試劑的有效性。使用 96 孔板的細胞量即可,，節(jié)省細胞和試劑,。
- 轉染時的細胞數(shù)范圍：
- 說明書中提供了最佳轉染條件下的細胞數(shù)量范圍，但在特殊情況下,，即使細胞數(shù)量較少,，也可以進行轉染。以 96 孔板為例,，建議細胞數(shù)量不低于 4×103/孔,，以確保后續(xù)檢測的可靠性。
- 轉染后細胞狀態(tài)與活力：
- 轉染后,，細胞狀態(tài)可能與未處理組略有差異,。但使用 ProteanFect 試劑進行轉染時，對細胞活力的損傷較小,。通常在轉染后第二天,，細胞狀態(tài)會基本恢復。
- 轉染后細胞離心后看不到沉淀：
- 對于小體積轉染體系（如 96 孔板）,，離心后細胞沉淀不明顯是正?，F(xiàn)象。細胞沉淀可能散落在離心管側壁,，不影響后續(xù)結果,。為減少細胞損失，離心后移液時應避免槍頭緊貼底部,。
- 轉染體系擴大是否影響轉染效率：
- 如轉染細胞量較大,，推薦使用離心管進行孵育，轉染體系參照表 4,，不會影響轉染效率,。
- 貼壁細胞如何轉染：
- 對于貼壁細胞,，可提前一天種板后進行轉染，也可消化成細胞懸液進行
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