在分子生物學和遺傳學的研究中,熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization, FISH)技術(shù)是一項革命性的進展,。它不僅為我們提供了一種強大的工具來研究基因的結(jié)構(gòu)和功能,,還幫助我們深入理解染色體異常與疾病之間的關(guān)系。本文將帶您穿越時間的長河,,探索FISH技術(shù)的起源,,以及它是如何發(fā)展成為現(xiàn)代分子生物學中重要的一部分。
一,、原位雜交技術(shù)的誕生
原位雜交(In Situ Hybridization, ISH)技術(shù)的概念最早可以追溯到20世紀60年代,。1969年,科學家們初次報道了使用放射性標記的DNA探針進行原位雜交實驗,,這一技術(shù)使得研究人員能夠在細胞或組織切片中定位特定的DNA序列,。盡管這一技術(shù)在當時取得了一定的成功,但由于放射性同位素的安全性和處理難度,,限制了它的廣泛應用,。
二、熒光標記的引入
到了20世紀70年代,,隨著非放射性標記技術(shù)的發(fā)展,,特別是生物素和地gao辛等標記物的出現(xiàn),原位雜交技術(shù)開始變得更加安全和易于操作,。然而,,真正的轉(zhuǎn)折點發(fā)生在80年代,當熒光標記技術(shù)被引入到原位雜交中,,形成了我們現(xiàn)在所知的熒光原位雜交(FISH)技術(shù),。這一進步極大地提高了檢測的靈敏度和多重性,使得在同一張切片上同時檢測多個DNA或RNA序列成為可能,。
三,、FISH技術(shù)的發(fā)展
在90年代,隨著熒光顯微鏡技術(shù)的進步和熒光染料的多樣化,,F(xiàn)ISH技術(shù)迎來了快速發(fā)展期,。研究人員開始利用不同顏色的熒光染料來標記不同的探針,從而在同一張切片上進行多重FISH實驗,。這使得FISH技術(shù)在染色體異常檢測,、癌癥研究和基因表達分析等領(lǐng)域得到了廣泛應用。
進入21世紀,隨著基因組學和個性化醫(yī)療的發(fā)展,,F(xiàn)ISH技術(shù)的應用范圍進一步擴大?,F(xiàn)代FISH技術(shù)不僅能夠檢測染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常,還能夠精確地定位基因在染色體上的位置,,為疾病的診斷和治療提供了重要信息,。此外,F(xiàn)ISH技術(shù)也被用于監(jiān)測細胞周期,、研究基因表達的動態(tài)變化,,以及探索細胞分化和發(fā)育過程中的基因調(diào)控機制。
四,、現(xiàn)代FISH技術(shù)的應用
熒光原位雜交技術(shù)從最初的概念到如今的廣泛應用,,經(jīng)歷了幾十年的發(fā)展和完善,。它不僅極大地推動了我們對基因和染色體的認識,,還為疾病的診斷和治療提供了強有力的工具。作為FISH技術(shù)的產(chǎn)品經(jīng)理,,我們自豪地見證了這一技術(shù)的成長,,并期待它在未來的科學研究和臨床應用中發(fā)揮更大的作用。隨著技術(shù)的不斷進步,,我們相信FISH技術(shù)將繼續(xù)為我們揭開生命奧秘的更多篇章,。
五、不同原位雜交技術(shù)的區(qū)別
同位素原位雜交(Radioactive In Situ Hybridization, RISH),、地gao辛原位雜交(Digoxigenin In Situ Hybridization, DIG-ISH)和熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization, FISH)都是用于檢測和定位核酸序列的技術(shù),,但它們在標記物、檢測方法和應用領(lǐng)域上有所不同,。以下是這三種技術(shù)的實驗周期和技術(shù)區(qū)別:
同位素原位雜交(RISH)
實驗周期:
RISH的實驗周期通常較長,,因為涉及到放射性同位素的使用,包括標記探針的制備,、雜交,、洗滌、曝光等步驟,。曝光時間可能需要幾天到幾周,,取決于所使用的放射性同位素和信號的強度。
技術(shù)特點:
- 使用放射性同位素(如^32P或^35S)標記的探針,;
- 高靈敏度和特異性,,適合于低豐度mRNA的檢測;
- 需要特殊的設備和安全措施來處理放射性物質(zhì),;
- 結(jié)果通常通過放射自顯影來可視化,,不適合多重檢測;
- 檢測指標數(shù)量:RISH通常一次只能檢測一個指標,即一個特定的核酸序列,。這是因為放射性標記的探針只能與一個特定的互補序列結(jié)合,,并且放射性信號的檢測通常不適用于多重檢測。
地gao辛原位雜交(DIG-ISH)
實驗周期:
DIG-ISH的實驗周期相對較短,,通常在幾天內(nèi)可以完成,。步驟包括探針的標記、雜交,、洗滌,、酶標記的抗體檢測和顯色。
技術(shù)特點:
- 使用地gao辛(DIG)標記的探針,,這是一種非放射性的標記物,;
- 通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)的原理,使用抗DIG抗體和酶(如過氧化物酶或堿性磷酸酶)進行信號放大和檢測,;
- 適合于組織切片和細胞的核酸檢測,;
- 結(jié)果通過顯色底物來可視化,不適合多重檢測,;
- 檢測指標數(shù)量:DIG-ISH同樣主要限于一次檢測一個指標,。雖然可以通過改變探針和相應的抗體來檢測不同的序列,但在一次實驗中同時檢測多個指標是不常見的,。
熒光原位雜交(FISH)
實驗周期:
FISH的實驗周期也相對較短,,通常在幾天內(nèi)可以完成。步驟包括探針的標記,、雜交,、洗滌和熒光信號的檢測。
技術(shù)特點:
- 使用熒光標記的探針,,如熒光素Cy3,、Cy5;TSA染料等,;
- 高靈敏度和多重檢測能力,,可以在同一樣本中檢測多個核酸序列;
- 結(jié)果通過熒光顯微鏡來可視化,,適合于定量分析和圖像分析,;
- 需要避免光漂白和熒光信號的重疊;
- 檢測指標數(shù)量:FISH技術(shù)在多重檢測方面具有明顯優(yōu)勢,。通過使用不同顏色的熒光標記,,可以在一次實驗中檢測多個核酸序列。例如,,可以使用不同顏色的熒光探針來標記不同的染色體或基因,,從而同時檢測多個指標,。理論上,F(xiàn)ISH可以檢測的指標數(shù)量只受限于熒光顯微鏡的檢測能力和可用的熒光通道數(shù)量?,F(xiàn)代的多重FISH技術(shù),,如光譜FISH(spectral FISH)和多色FISH,可以同時檢測多達幾十個不同的核酸序列,。
總結(jié)
-靈敏度:RISH通常具有最高的靈敏度,,適合于低豐度目標的檢測;
-多重檢測:FISH較適合于多重檢測,,可以同時檢測多個核酸序列,;
-安全性:DIG-ISH和FISH都是非放射性的,操作更安全,,不需要特殊的放射性物質(zhì)處理設施,;
-可視化:FISH的結(jié)果可以直接通過熒光顯微鏡觀察,而RISH和DIG-ISH需要額外的顯影或顯色步驟,。
在選擇技術(shù)時,,需要考慮實驗的具體需求,包括所需檢測的指標數(shù)量,、樣本類型,、實驗成本和可用設備等因素,。
【小愛新品好物速遞】
原位雜交(in situ hybridization)技術(shù)已經(jīng)被廣泛應用于檢測目標蛋白或DNA分子在細胞或組織切片上的位置和數(shù)量,,但對于大部分目標RNA分子的檢測,傳統(tǒng)方法由于特異性和靈敏度無法兼顧,,通常無法得到好的檢測結(jié)果,。
GeneScope多色熒光核酸原位檢測試劑盒利用創(chuàng)新的短片段探針組合設計和特別的莖環(huán)結(jié)構(gòu)核酸蛋白級聯(lián)信號放大系統(tǒng),兼顧解決了特異性和靈敏度問題,,可以在樣本上原位檢測低至1拷貝的目標核酸分子(如下圖),。每一種待測核酸在反應中將被標記上辣根過氧化物酶,繼而加上特定熒光底物后經(jīng)酩胺催化反應被標記上該種特定波長的熒光分子,,然后再進行下一輪標記反應,。最多經(jīng)過如此三輪反應即可分別標記3個通道熒光以檢測三種核酸分子。整個實驗大約需時6-10h,。
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
abs500006 | GeneScope多色熒光RNA原位檢測試劑盒(單色) | 40T |
abs500007 | GeneScope多色熒光RNA原位檢測試劑盒(雙色) | 40T |
abs500008 | GeneScope多色熒光RNA原位檢測試劑盒(三色) | 40T |
abs500003 | GeneScope多色熒光DNA原位檢測試劑盒(單色) | 40T |
abs500004 | GeneScope多色熒光DNA原位檢測試劑盒(雙色) | 40T |
abs500005 | GeneScope多色熒光DNA原位檢測試劑盒(三色) | 40T |
abs500009 | GeneScope細胞RNA熒光原位檢測試劑盒(單色) | 24T |
abs500010 | GeneScope細胞RNA熒光原位檢測試劑盒(雙色) | 24T |
abs500011 | GeneScope細胞RNA熒光原位檢測試劑盒(三色) | 24T |
abs500012 | GeneScope細胞RNA熒光原位檢測試劑盒(四色) | 24T |
Absin產(chǎn)品線:
爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC,、IHC、凋亡,、ELISA,、ChIP、Co-IP,、TR-FRET,、生化檢測,、殘留檢測、多因子檢測),;細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒,;分子(mRNA合成服務+提取試劑盒),;化合物大包裝;輔助試劑,、耗材/儀器,、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27,、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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