引言AOAC QuEChERS 方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品中農(nóng)藥殘留的分析[1-2],。該方法應(yīng)用乙腈提取,,再由無水硫酸鎂 (MgSO4) 脫去樣品中的水,并以醋酸鹽緩沖液促進(jìn)分配,。凈化時,,聯(lián)合應(yīng)用分散型固相萃取小柱與 PSA(N-丙基乙二胺)小柱以除去樣品基質(zhì)中的有機(jī)酸,再用無水硫酸鎂除去提取物中的水分,。根據(jù)食品基質(zhì)的不同,,在這一步驟中可以加入其他成分,如用石墨化碳黑(GCB) 去除色素和甾醇,,或用 C18 去除脂肪和蠟質(zhì),。本文中,選用了適用于含脂肪和蠟質(zhì)樣品的 AOAC 分散型 SPE試劑盒,。該試劑盒適用的樣品量為 1 mL,,包含 PSA 50 mg、MgSO4 150 mg,、C18 50 mg,,可加入每毫升乙腈提取物中。本研究中,,采用 12 種農(nóng)藥來評價 Agilent Bond Elut AOAC 緩沖提取試劑盒 (p/n 5982-5755) 和適用于含有脂肪和蠟質(zhì)的水果和蔬菜的 Bond Elut QuEChERS AOAC 分散型 SPE 試劑盒 (p/n5982-5158) 的性能,。通過回收率和重現(xiàn)性的測定進(jìn)行了方法驗證。表 1 顯示了大米中這些殘留農(nóng)藥的化學(xué)和信息,。
實驗部分試劑和化學(xué)品所有的試劑和溶劑均為 HPLC 或分析級,。甲酸和乙腈來自Honeywell(Muskegon, MI, 美國),甲酸來自 Fluka(Sleinheim,德國),。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品購自 Sigma-Aldrich(St Louis, MO, 美國),,內(nèi)標(biāo)物質(zhì)磷酸三苯酯 (TPP) 來自安捷倫科技公司(Wilmington,DE, 美國)。標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)儲備液(除多菌靈為 0.5 mg/mL外,,其余均為 2.0mg/mL)分別由甲醇,、含 0.1% 甲酸的乙腈溶液和 DMSO 溶解制成,在 –20°C保存,。三種濃度分別為 0.2,、1 和 10 µg/mL 的QC 加標(biāo)溶液每天用 0.1% 甲酸水溶液-乙腈 (1:1) 新鮮配制。TPP濃度為 10 µg/mL 的內(nèi)標(biāo)加標(biāo)溶液用 0.1% 甲酸水溶液-乙腈(1:1)配制,。
設(shè)備和材料安捷倫 1200 系列 HPLC(安捷倫科技公司, CA, 美國)帶電噴霧的安捷倫 6460 三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)(安捷倫科技公司, CA, 美國)Agilent Bond Elut AOAC 緩沖提取試劑盒 (p/n 5982-5755) 和適用于含有脂肪和蠟質(zhì)的水果和蔬菜的 Bond Elut QuEChERSAOAC 分散型 SPE 試劑盒 (p/n 5982-5158)(安捷倫科技公司,DE, 美國)安捷倫陶瓷勻漿器,,50 mL 離心管 (p/n 5982-9313)(安捷倫科技公司, DE, 美國)Eppendorf 微量離心機(jī)(Brinkmann Instruments, Westbury, NY,美國)NY, USA)飛鴿牌離心機(jī)(安亭科學(xué)儀器廠,中國上海)
樣品制備樣品粉碎不含農(nóng)藥的有機(jī)生長大米購自當(dāng)?shù)厥袌?。將該大米置于干凈塑料袋中?20°C 冷凍過夜,。時常揉捏塑料袋,以保證大米顆粒不結(jié)塊。第二天,,取出所需用量的冷凍大米,,混勻,。邊粉碎邊加入干燥大米,。樣品粉碎以保證其均勻性。在最終制成的樣品中無肉眼可見大米顆粒,,證明粉碎完,。提取/分配取 5 g (±0.1 g) 均勻樣品,置于 50mL 離心管中,。用 100 µL 適宜濃度的 QC 標(biāo)準(zhǔn)溶液制成加標(biāo)的 QC 樣品,。除空白樣品外,其余所有樣品中均加入 50 µL 內(nèi)標(biāo)溶液,,制成內(nèi)標(biāo)濃度為 100 ng/g 的樣品溶液,。蓋上離心管,渦旋混合 1 分鐘,。用移液器往每管中加水10 mL,,加蓋,渦旋混合 1 分鐘,。每管中放入兩個適用于 50 mL離心管的陶瓷勻漿器 (p/n 5982-9313),。用移液器往每管中加入ACN (0.1% AA) 15 mL。蓋上離心管,,用手振搖 1 分鐘,。每管中直接加入安捷倫 Bond Elut QuEChERS AOAC 提取鹽 1 包,其中含無水硫酸鎂 6 g,,醋酸鈉 1.5 g,。將離心管密封,用手劇烈振搖20 秒,,確保溶劑與樣品相互作用,,同時塊狀結(jié)晶充分散開。樣品管以 4000 轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心 5 分鐘,。分散型 SPE 凈化移取 8 mL 上層乙腈液,,置于 15 mL 安捷倫 Bond Elut QuEChERSAOAC 分散型 SPE 試管 (p/n 5982-5158) 中。該 15 mL 試管中包含 PSA 400 mg,,無水硫酸鎂 1200 mg,,以及 C18 400 mg。將試管蓋緊,,渦旋混合 15 分鐘,,并以 4000 轉(zhuǎn)/分的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)速離心 5分鐘。移取 1 mL 提取液,,置于 10 mL 試管中,,在 40°C 用氮氣吹干,。所得殘渣用乙腈-水 (1:9) 溶解并定容至 1 mL,用 0.45 µm 濾膜 (p/n 5185-5836) 濾過,,取濾液用 LC-MS/MS 進(jìn)行分析,。
結(jié)果與討論根據(jù)推薦,本次研究選用了適合含脂肪與蠟質(zhì)樣品的 AOAC 分散型 SPE 試劑盒對大米進(jìn)行處理,。由于 LC-MS/MS 的高選擇性,,空白基質(zhì)樣品的 MRM 色譜圖顯示其對目標(biāo)化合物沒有干擾峰。圖 1 和圖 2 分別為加內(nèi)標(biāo)的空白基質(zhì)和用 AOAC 分散型 SPE 方法處理的 10 ng/g 加標(biāo)大米樣品提取物的 LC-MS/MS 色譜圖,。
線性和定量限(LOD)所有待測農(nóng)藥的線性校正范圍為 5-500 ng/g,。用空白基質(zhì)加標(biāo)的校正曲線其濃度水平分別為 5、10,、50,、250 和 500 ng/g,內(nèi)標(biāo)物質(zhì) TPP 的濃度為 50 ng/g,。用待測組分的相對響應(yīng)值(待測組分峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積)對待測組分的相對濃度(待測組分濃度/內(nèi)標(biāo)物濃度)作圖,,得到校正曲線。所有農(nóng)藥的定量限為 5 ng/g,,低于這些農(nóng)藥在水果和蔬菜中的最高殘留(MRL),。表 3 列出線性回歸方程和相關(guān)系數(shù) (R2)。
回收率和重現(xiàn)性通過在粉碎的樣品中加入農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品制成 10,、50 和 250 ng/g的不同濃度水平的加標(biāo)樣品,,對方法的回收率和重現(xiàn)性進(jìn)行了評價。用標(biāo)準(zhǔn)加入曲線對這些 QC 樣品進(jìn)行定量分析,。每個濃度水平重復(fù)測定 6 次,。回收率和重現(xiàn)性(用 RSD 表示)數(shù)據(jù)見表 4和圖 3,??梢钥闯觯?2 種農(nóng)藥組分均得到了很好的回收率和精密度,。
結(jié)論安捷倫 Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒和用于含脂肪和蠟質(zhì)的果蔬的分散型 SPE 試劑盒為大米中有代表性的農(nóng)殘測定提供了一種簡便,、快速而有效的方法?;|(zhì)加標(biāo)樣品的回收率和重現(xiàn)性顯示,,該方法可用于大米中多類別、多組分農(nóng)藥殘留的檢測,。大米中的雜質(zhì)和基質(zhì)效應(yīng)不干擾目標(biāo)化合物的定量分析,。農(nóng)藥組分的定量限低于監(jiān)管要求的大米中最高殘留。由于本研究中所選擇的農(nóng)藥代表了廣泛的農(nóng)藥類別和性質(zhì),對于類似食品基質(zhì)中其他農(nóng)藥殘留的檢測,,安捷倫 Bond Elut QuEChERSAOAC 提取和分散型 SPE 試劑盒也是一種選擇,。
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