案例1：?jiǎn)捂湽押塑账醤,，n-1雜質(zhì)分離

案例2：DNA片段雜質(zhì)分離分析

根據(jù)樣品的吸附差異，在方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中可以不同種類(lèi)的緩沖液和洗脫鹽類(lèi)型,，因?yàn)樗鼈兌伎梢燥@著影響峰形和分辨率,。

可以選擇不同的pH鹽，例如Tris-HCl ,、NaOH緩沖液與NaCl或者NaClO4搭配使用,。

一般情況下，目標(biāo)樣品以20 ~ 50 mM的緩沖溶液為弱洗脫流動(dòng)相,，此時(shí)通常樣品待測(cè)物吸附到色譜柱上,，然后通過(guò)鹽濃度梯度（NaCl或者高氯酸鈉進(jìn)行洗脫，濃度一般通過(guò)梯度增加到0 ~ 0.5 M左右,，有的時(shí)候可能更高）,，或pH梯度洗脫。 建議每次運(yùn)行時(shí)用含有1m NaCl的緩沖溶液清洗色譜柱,，以去除殘留在柱上的雜質(zhì),，這些雜質(zhì)在最終流動(dòng)相中沒(méi)有被洗脫。

高pH條件以及高柱溫可以有效提升分辨率,。但是如果樣品的穩(wěn)定性較差,，則推薦使偏中性洗脫液，溫度40℃條件下分離

PS修飾的寡核苷酸的保留大大增加,，對(duì)于PS修飾寡核苷酸的純化,，高pH和離子強(qiáng)度有利結(jié)合分子的洗脫，洗脫流動(dòng)相選擇NaClO4更合適,。

一般來(lái)說(shuō),，通過(guò)離子交換進(jìn)行生物分子的分離分析，采用的是水相緩沖體系,，但對(duì)于寡核苷酸的純化,，對(duì)分離效率要求較高。在流動(dòng)相中加入有機(jī)改性劑可以改變分離效果,，一般不超過(guò)30%

不要使用含有氧化劑的溶劑作為流動(dòng)相,。

色譜柱保存在20 mM Tris-HCl buffer (pH 8.1)中,。

色譜柱柱溫最高不要超過(guò)60℃使用，

色譜柱耐受的pH范圍是2-12,。

脂溶性物質(zhì)和弱極性物質(zhì)可能吸附到色譜柱上,，導(dǎo)致停留時(shí)間、峰形 和壓力的變化,。在這些情況下,，按照程序洗滌色譜柱：依次使用(1) 0.2 N NaOH水溶液/乙腈（80/20）；(2) 1 M醋酸水溶液,；(3)加入非離子表面活性劑的流動(dòng)相,；(4)流動(dòng)相為6m鹽酸胍，依次沖洗4-5mL,。每次沖洗溶劑注入清洗后,，檢查 保留時(shí)間和峰形是否恢復(fù)。