各種動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒 規(guī)格：3×200 mL/kit 保存：本產(chǎn)品對(duì)光敏感,，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年,。無(wú)菌開(kāi)封后,，保存于室溫。 組成： 各種動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞分離液 200mL 全血及組織稀釋液 200mL 細(xì)胞洗滌液 200mL 產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本品僅供科研使用,。 本產(chǎn)品是一種用于分離動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞的無(wú)菌,、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其 分離原理是根據(jù)血細(xì)胞的密度差異,，通過(guò)離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,，從而將 淋巴細(xì)胞從外周血中分離出來(lái)。適用于從動(dòng)物抗凝血液中分離淋巴細(xì)胞,，無(wú)菌條件下分離的淋 巴細(xì)胞可用于培養(yǎng),。 操作步驟： 1. 取新鮮抗凝全血（EDTA,、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的 全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血,。 2. 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時(shí),，加入3mL分離液；大于等于 3mL,，加入等體積分離液,。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離 效果）,，將稀釋后的血液平鋪到分離液 液面上方,，注意保持兩液面界面清晰。 （可以使用巴氏德吸管吸取血液,，然后 將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮?者的密度差異,，將形成明顯的分層界面,。 如果樣品較多加樣時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之 前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象,。） 3. 室 溫 ， 水 平 轉(zhuǎn) 子 500~1000g ,， 離 心 20~30min（血液的體積越大所需的離心 力越大,，離心時(shí)間越長(zhǎng)，最佳的分離條 件需摸索,，離心轉(zhuǎn)速最大不超過(guò)1200g） 4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀 釋的血漿層,，中間是透明的分離液層， 血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴2 / 2 細(xì)胞層,，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞,。 5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞,。 250g,，離心10min。 6. 棄上清,，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,，250g，離心10min,。 7. 重復(fù)步驟6 8. 棄上清,，細(xì)胞重懸備用。 注意事項(xiàng)： a) 開(kāi)封前顛倒混勻,，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品,，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間,，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封， 避免微生物污染,。 b) 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃）,，如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱,。4℃或 者是溫度較低的條件下離心,，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。 c) 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)）,，為保持淋巴細(xì)胞的活性,，應(yīng)避免冷凍和冷藏。 d) 稀釋血液或洗滌細(xì)胞,，不可使用含Ca,、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝 集,，大大降低細(xì)胞得率及純度,。 e) 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁影響分離效果,。 f) 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,， 摸索最佳的分離條件,。 g) 吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì) 胞數(shù)量增加；吸取過(guò)多的血漿層可能會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染,。 h) 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),，那在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作,，避免 微生物污染,。 i) 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí) 應(yīng)提供所需分離液的比重,、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱,。