細胞復蘇和凍存是細胞培養(yǎng)中常見的操作,，主要用于保存和恢復細胞系。以下是一些基本的步驟和注意事項：
### 細胞凍存（Cryopreservation）
1. **細胞準備**：選擇生長狀態(tài)良好的細胞,，通過胰蛋白酶或EDTA等消化細胞,，使其成為單個細胞懸液,。
2. **細胞計數(shù)**：使用細胞計數(shù)器確定細胞密度。
3. **加入凍存液**：將細胞懸液與凍存液按一定比例混合,，常用的凍存液含有DMSO或丙三醇等作為保護劑,。
4. **分配細胞**：將細胞懸液分配到凍存管中，通常每管的細胞量是1-2mL,。
5. **逐步降溫**：
- 短期保存：可以立即將凍存管放入-80°C冰箱或液氮罐中的凍存盒中,。
- 長期保存：通常采用程序降溫機進行逐步降溫,，以防止細胞內(nèi)冰晶形成，造成損傷,。
6. **儲存**：將凍存管存放在液氮罐中,，溫度約為-196°C。
### 細胞復蘇（Thawing）
1. **準備**：從液氮罐中取出所需的凍存管,，快速轉(zhuǎn)移至37°C水浴中,。
2. **解凍**：在水浴中輕輕搖動凍存管，直到冰wan全融化,。
3. **去除凍存液**：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到含有wan全培養(yǎng)基的離心管中,，輕輕混合。
4. **離心**：通常以低速（約100-200g）離心5-10分鐘,，以沉淀細胞,。
5. **去除上清**：小心去除上清液，避免擾動細胞沉淀,。
6. **重懸和接種**：將細胞重懸于適量的wan全培養(yǎng)基中,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器中進行培養(yǎng)。
### 注意事項
- **無菌操作**：整個過程需在無菌條件下進行,，避免污染,。
- **凍存液的選擇**：不同細胞類型可能需要不同的凍存液配方。
- **細胞密度**：凍存時細胞密度不宜過高,，以免影響復蘇后的細胞活性,。
- **解凍速度**：快速解凍有助于減少細胞損傷。
- **復蘇后的監(jiān)測**：復蘇后需檢查細胞生長狀態(tài)和污染情況,。
細胞凍存和復蘇的成功與否直接關(guān)系到細胞系的質(zhì)量和長期使用的可行性,，因此這些操作需要嚴格遵循標準操作程序（SOP）。