一、引言

寵物通常被視為我們直系家庭中毛茸茸的（有鱗,、有羽毛等）成員,，在現(xiàn)代生活中扮演著重要角色。寵物用品從加熱床到專業(yè)美容服務應有盡侑,，因此它們的飲食受到更嚴格的審查也就不足為奇了,。狗糧形式多樣，不同食譜對健康有益也有風險,。近來,，無谷物或富含豆類的飲食因其與犬類心臟病——擴張型心肌病（DM）之間的聯(lián)系而受到質疑,，這種疾病可導致充血性心力衰竭,，最終可能導致死亡。DM是由于缺乏?；撬嵋鸬?，因此狗的飲食必須含有足量的牛磺酸,。

在本研究中,，使用Discover Prep™系統(tǒng)水解狗糧樣本，以將氨基酸從其結合的蛋白質中釋放出來,。與傳統(tǒng)的水解技術相比,，Discover Prep利用微波進行樣本水解，將技術的時間框架從24小時縮短至不到一小時,。水解后,，樣本被中和，并使用Waters AccQ-Tag®試劑盒測量氨基酸含量,。結果表明,，與傳統(tǒng)方法相比，Discover Prep能夠迅速且準確地從寵物食品中的蛋白質水解出?；撬?，具有很好的精確度,。無谷物狗糧和含谷物狗糧樣本的?；撬岷窟M行了比較。對于實驗室量化狗糧中的?；撬岷推渌被岫?，Discover Prep是一個理想的選擇,。

二,、材料與方法

試劑和樣品

所有試劑均購自商業(yè)供應商,。所有狗糧樣品均從當?shù)貙櫸镉闷返曩徺I。所有狗糧樣品均使用商用廚房攪拌機研磨,。選擇這些狗糧是因為它們的主要蛋白質成分不同,，并且標稱含有高含量的牛磺酸,。分析了三個樣品：樣品1是三文魚,、紅薯和南瓜配方，樣品2是雞肉和紅薯配方,，樣品3是火雞和燕麥配方,。水解溶液在使用前新鮮制備。

狗糧樣品使用CEM Discover Prep系統(tǒng)進行水解,。通過柱前衍生化測定水解產(chǎn)物的氨基酸含量,，然后通過UPLC^®注射和在260 nm下的PDA檢測進行分析。使用Waters AccQ-Tag Ultra衍生化試劑盒對水解產(chǎn)物進行LC-PDA分析,。Discover Prep樣品制備的結果與傳統(tǒng)烤箱法及營養(yǎng)標簽進行了比較,。

Discover Prep樣品制備

將100毫克狗糧樣品加入裝有攪拌棒的35 mL Discover Pyrex^®小瓶中。記錄質量以供分析,。對于酸性水解,，向每個小瓶中加入5毫升含1%苯酚的6 N HCl。所有小瓶用N₂吹掃1分鐘,，然后迅速蓋上蓋子,。樣品按以下Discover Prep方法運行：

酸性水解

小瓶類型：Pyrex

控制類型：動態(tài)

溫度：160 °C

時間：30分鐘

壓力：300 PSI

功率：300 W

攪拌：高

傳統(tǒng)水解樣品制備

將40毫克狗糧樣品加入適當?shù)牟Ａ∑恐小Ｓ涗涃|量以供分析,。對于酸性水解,，向每個小瓶中加入2毫升含1%苯酚的6 N HCl。所有小瓶用N₂吹掃1分鐘,，然后迅速蓋上蓋子,。然后將小瓶放入設定為110 °C的空氣烘箱中24小時。

水解后樣品制備和衍生化分析

酸性水解樣品用6 N NaOH中和,，并用0.26 µm PTFE注射器過濾器過濾,。中和后，樣品用Waters AccQ-Tag試劑盒進行衍生化,。向一個完整的回收小瓶中加入80 µL來自Waters AccQ-Tag Ultra衍生化試劑盒的硼酸緩沖液,。然后，加入10 µL樣品并蓋緊蓋子渦旋,。接著,，向每個樣品反應中加入10 µL準備好的衍生化試劑,。最后，將反應渦旋10秒鐘,，然后在55 °C下加熱10分鐘進行分析,。

分析

每個衍生化反應取1 μL樣品注入Waters AccQ-Tag Ultra C18柱（1.7 μm, 2.1 x 100 mm），該柱連接到帶有Waters PDA檢測器的Waters ACQUITY™ H-Class UPLC^®,。流速設定為0.4 mL/min,。柱溫保持在55 °C，吸收波長監(jiān)測在260 nm,。用于分離的洗脫梯度如表1所示,。流動相為A: Milli-Q^®水中稀釋10倍的Waters AccQ-Tag洗脫液A和B: Waters AccQ-Tag洗脫液B。為了每種氨基酸創(chuàng)建校準曲線,，使用Waters Amino Acid Food and Feed Standard Kit（Waters Corporation, SKU. 186009299）進行衍生化,，濃度分別為1, 5, 10, 25, 和50 pmol/μL。采用線性回歸法分析樣品,。

表1. 衍生化氨基酸分離所用梯度

三、結果

圖1. Discover Prep水解中回收的?；撬崃?/span>

圖2. 從狗糧中回收的氨基酸量

四,、結論

Discover Prep微波反應系統(tǒng)成功水解了寵物食品中的氨基酸,，并產(chǎn)生了與傳統(tǒng)烘箱水解相似的結果。在比較氨基酸含量時,，傳統(tǒng)烘箱水解和Discover水解的結果%RSD均小于10%,。在比較狗糧的牛磺酸含量時,，樣品1的含量最高,，其次是樣品2和樣品3。