很多想使用Lonza核轉設備的小伙伴常常會遇到想做電轉但是無從下手的情況,。有些小白不知道怎么做,，也不知道應該準備些什么,。那么針對這些問題,，小編上次為大家整理了一些挑選試劑盒和試驗條件的攻略，如有需要請戳下方鏈接查看：

Lonza 4D-核轉儀器試驗操作全流程攻略（1）——如何選擇需要的試劑盒和程序

那么接下來,，給大家再介紹一下4D核轉儀器的操作流程,。大家可以根據(jù)以下流程去著手實驗啦，有問題可以在評論區(qū)提問哦,！

電穿孔是一種常用的物理轉染方法,。電轉染是在瞬間強大電場的作用下把外源大分子物質DNA,、RNA,、siRNA,、蛋白質等以及一些小分子導入細胞膜內(nèi)部的一個過程。其原理為：細胞和DNA懸浮在電穿孔緩沖液中,，對細胞施加高壓脈沖,，電脈沖在細胞膜上產(chǎn)生電位差,，使膜產(chǎn)生了一定的通透性,，以便DNA進入。電轉染是一種非常普遍且高效的轉染方法,，可用于幾乎所有的細胞類型的轉染,。

電轉染整體操作簡單迅速,，想要做好電轉試驗,，那么試驗前后的準備工作是,，具體流程小編以文字形式整理如下，文章末附流程圖,。

*注：本方案為個人整理，試驗具體的方案及細節(jié)請參考Lonza提供的Protocol,。

實驗準備

我們需要根據(jù)的細胞信息確定我們的細胞適合的程序代碼、細胞數(shù),、試劑盒等相關信息,。

在試驗前，需要根據(jù)試驗的樣品數(shù)量準備試劑耗材,、其中用來后續(xù)使用的培養(yǎng)基和培養(yǎng)板需要進行37℃進行預熱,。

將試劑盒孵育至室溫,，并將試劑盒內(nèi)的solution與supplement按照4.5：1的比例混合均勻,。

提前準備好對數(shù)生長期的細胞（具體培養(yǎng)方案可參考查到的protocol）。

將儀器開機并設置好程序,。

開始實驗

將細胞處理成單細胞懸液,，選取所需細胞進行離心。注意消化時間與離心力,。

離心過后,，小心吸取上層培養(yǎng)基，盡量吸取干凈,，并用配置好的電轉buffer重懸細胞,。

3,、加入電轉底物：質粒,、RNP、RNA等,。并混合均勻,。（RNP比質粒體積小很多，對于大質粒可以考慮RNP體系,，文末附解決方案）

4,、將混勻的液體加入到電轉的耗材中，應該注意的是,，加完的液體應該在容器底部,，內(nèi)部和上方?jīng)]有氣泡，且液面兩端高度一致,，與容器底物保持平行,。

5、整體試驗流程盡量快一些,，樣品檢查無誤后,，直接上機。

實驗后處理

將電轉后的耗材從儀器中取出,。

輕柔加入預熱的培養(yǎng)基,，混勻細胞。,。

將混勻的液體加入到最終的培養(yǎng)板中并補全培養(yǎng)體系,。

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