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實(shí)驗(yàn)室組織細(xì)胞破碎方法(超聲波細(xì)胞粉碎機(jī))

來(lái)源:杭州安研儀器制造股份有限公司   2024年12月20日 17:13  

       實(shí)驗(yàn)室對(duì)組織細(xì)胞的破碎方法很多,,有機(jī)械方法,、物理方法,、化學(xué)方法和生物化學(xué)方法等,。
在破碎前,,材料常需要預(yù)處理,,如動(dòng)物材料要除去與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)甚至有妨礙的結(jié)締組織,,脂肪組織和血污等,植物種子需要除殼,,微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開(kāi)等,。不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模、不同實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)要求,,使用的破碎方法和條件也不同,。一些堅(jiān)韌組織,,如肌肉、植物的根莖等,,常需要強(qiáng)烈的攪拌或研磨作用,,才能把其組織細(xì)胞破壞,。而比較柔軟的組織如肝,、腦等,用普通的玻璃勻漿器即可達(dá)到破壞細(xì)胞的目的,。對(duì)同一實(shí)驗(yàn)材料,,由于實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ螅┑牟煌捎玫钠扑榉绞揭泊嬖趛i定差異,,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,,前者保持溫和的條件,以保持分子的完整性,;后者可采用強(qiáng)烈手段,。
  1. 機(jī)械法
  主要通過(guò)機(jī)械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機(jī),、勻漿器,、研缽和研磨、壓榨器等,。
  1)組織搗碎機(jī) 一般用于動(dòng)物組織,、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,,轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上,。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
  2)勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在之幾毫米距離,,破碎細(xì)胞的程度比組織搗碎機(jī)高,。制作勻漿器的材料,除玻璃外,,還可以用硬質(zhì)塑料,、不銹鋼、人造熒光樹(shù)脂等,。
  3)研缽 多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料,,研磨時(shí)常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,,以提高研磨效果,。
  4)細(xì)菌磨 是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,,而且低部有出口,。操作時(shí)先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀,,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞磨碎,。
  2. 物理法
  主要通過(guò)各種物理因素使組織細(xì)胞破碎的方法,。在生化制備中常用的方法有:
  1)反復(fù)凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,再緩慢的融化,,反復(fù)多次,,多用于動(dòng)物性材料。
  2)急熱驟冷法 將材料投入沸水中,,維持85-90分鐘,,至水浴中急速冷卻,此法可用于細(xì)菌及病毒材料,。
  3)超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC,,功率200-500瓦范圍,處理時(shí)間有數(shù)分鐘至數(shù)鐘不等,,處理過(guò)程中注意冷卻,。此法多用于微生物材料。
  3.化學(xué)及生物化學(xué)法
  有自溶法,,酶解法和表面活性劑法等,。
  

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