l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中雞白痢雞傷寒抗體（PT Ab）的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供科研使用,，不得用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被雞白痢雞傷寒抗體（PT Ab）捕獲抗原的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹di洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的雞白痢雞傷寒抗體（PT Ab）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

樣本處理及要求

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測,。

4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。 

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

備注：

1.  標準品濃度依次為：800,、400、200,、100,、50、25 ng/mL

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗,，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標準品濃度時,，可用樣本稀釋液將標本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗,。

注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑,。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值,。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射,。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

實驗結(jié)果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度,。

試劑盒性能

1.  檢測范圍：25 ng/mL – 800 ng/mL,。

2.  靈敏度：最di檢測濃度小于1.0 ng/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,，板間變異系數(shù)小于15% 。

說明

由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險,。

1. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),，請務(wù)必準備充足的標本備份,。

2. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限,、靈敏度以及顯色時間等,，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考,。

3. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,，不能混用其他制造商的產(chǎn)品,。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。

4. 本公司只對試劑盒本身負責(zé),，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé),，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本,。

5. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差,。

6. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多,，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量,、采樣時間等,，所以可能存在檢測不出的情況。

7. 某些天然蛋白或重組蛋白,，包括原核及真核重組蛋白,，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出,。