一,、原理

　　PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋,，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,，在Taq DNA聚合酶，dNTPs,，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,，重復(fù) “變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數(shù)級擴(kuò)大待測樣本中的核酸拷貝數(shù),。

二,、分類

1. 普通的PCR儀

　　一次PCR擴(kuò)增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，又叫傳統(tǒng)的PCR儀,。

　　用途：主要是做一些簡單的,、對單一退火溫度的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。

　?。?）梯度PCR儀： 一次PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),，通常為12種溫度梯度的普通PCR儀。

　　用途：研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,。

　?。?）原位PCR：將具有細(xì)胞定位能力的原位雜交技術(shù)運用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析，在細(xì)胞內(nèi)實現(xiàn)基因擴(kuò)增的普通PCR儀,。

　　用途：用于在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增,。

2. 實時熒光定量PCR儀

　　PCR擴(kuò)增時加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記,，使引物和熒光探針同時與模板進(jìn)行特異性結(jié)合，擴(kuò)增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng),，實時輸出量化結(jié)果,，這樣的PCR儀叫實時熒光定量PCR儀。

　?。?）金屬板式實時定量PCR儀

　　可作為普通PCR儀使用

　　可帶梯度功能

　　可容納的樣本量大,，無需特殊耗材

　　溫度均一性欠佳，有邊緣效應(yīng),，標(biāo)準(zhǔn)曲線的反應(yīng)條件難以做到與樣品全一致

　?。?）離心式實時定量PCR儀

　　溫度均一性較好

　　使用的是同一個激發(fā)光源和檢測器，隨時檢測旋轉(zhuǎn)到跟前的樣品,，有效減少系統(tǒng)誤差

　　可容納樣品量少,，有的需用特殊毛細(xì)管作樣品管，增加了使用成本,，也不帶梯度功能

　?。?）各孔獨立控溫的定量PCR儀

　　不同樣品槽分別擁有獨立的智能升降溫模塊，各孔獨立控溫,，適合多指標(biāo)快速檢測,。

　　SmartCyclerⅡ的軟件允許一臺儀器同時操作六個樣品模塊，既滿足高速批量要求,，又能靈活運用,，還可實現(xiàn)任意梯度反應(yīng)。

　　SmartCyclerⅡ上樣不如傳統(tǒng)方法方便,，而且需要有的扁平反應(yīng)管,，使用成本較高。

三,、操作規(guī)程

　　普通PCR擴(kuò)增儀的操作非常簡便,，接通電源，儀器自檢,，設(shè)置溫度程序或調(diào)出儲存的程序運行即可,。

　　定量PCR擴(kuò)增儀的操作和普通PCR儀基本相同。

四,、常見故障

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　?、赑CR管融化,，原因可能是溫度傳感器出問題或是熱蓋出問題；

　　③個別孔擴(kuò)增效率差異很大,，可能的原因是半導(dǎo)體模塊出現(xiàn)壞點；

　?、軣晒鈴?qiáng)度減弱或不穩(wěn)定,，產(chǎn)生的原因有濾光片發(fā)霉或有水汽，或光源損耗（以鹵鎢燈為光源的）,，需更換光源,；或需調(diào)節(jié)檢測元件靈敏度；

　?、輧x器工作時出現(xiàn)噪音,。

　　以上故障部分可自行檢查，部分需工程師檢修,。