神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞,；H4操作步驟:

1,、貼壁細胞的消化

①吸除培養(yǎng)液,，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,，以去除殘余的血清,。

②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可,，室溫放置 0.5～2min,， 不同的細胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察,，細胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,，吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養(yǎng)液,，吹打下細胞,，即可直接用于后續(xù)實驗。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化,。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞,，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,， 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min,，沉淀細胞,，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,，即可用于后續(xù)實驗,。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,，通常以消化后可以充分打散組織為宜,。

在組織的消化過程中，首先需將選取的組織樣本剪切成細小的碎片,，以便于消化酶更好地滲透和作用,。隨后，將這些碎片轉(zhuǎn)移至含有適量生物 Trypsin-EDTA solution 或其他適宜組織消化酶的容器中,，根據(jù)組織的類型和硬度,，消化時間可從數(shù)分鐘至數(shù)小時不等，期間需不時觀察并輕柔振蕩,，以促進消化均勻進行,。

當(dāng)觀察到組織碎片已明顯分散成單個細胞或較小的細胞團塊時,，表明消化過程基本完成。此時,，應(yīng)立即終止消化,，可通過加入含有血清的細胞培養(yǎng)液來中和消化酶。使用吸管或移液器輕輕吹打消化液,，以促進細胞進一步分散,。

之后，將含有消化后細胞的懸液通過細胞篩網(wǎng)過濾,，以去除未消化的組織碎片和雜質(zhì),。接著，將過濾后的細胞懸液進行離心處理,，轉(zhuǎn)速同樣控制在1000～2000g,，離心時間1～2分鐘，以沉淀細胞,。離心后,，小心吸除上清液，再加入含血清的培養(yǎng)液,，輕輕吹打重懸細胞,，使其達到適宜的濃度和活性狀態(tài)，為后續(xù)的實驗操作如細胞培養(yǎng),、分析或分離特定類型細胞等做好準備,。