惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞；NTERA-2操作流程：

1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：

1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),，在37℃,、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。

1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次,，細(xì)胞長至60%～70%融合時,，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁,、懸浮,、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,，獲得細(xì)胞懸液,，然后加入倍量的培養(yǎng)基,，溫和混勻，吸管分裝混合液,，傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。

1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。

1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,，待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心,，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),，按公式計算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。

1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞,，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液,，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,，取其平均值,，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率,。

1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液,，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機(jī)取3孔,，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。