IHC未染色或無信號的原因:
一,、?抗體問題?:
抗體與一抗或二抗不兼容,、抗體濃度不合適,、抗體失效或儲存不當?shù)榷紩е聼o染色,。例如,,使用抗一抗種屬來源的二抗,確認二抗是否識別一抗的亞型,;使用更高濃度的抗體或延長孵育時間,;設置陽性對照,,確??贵w仍然有效?。
二,、?抗原修復不足?:
固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位,,導致抗原修復不足。使用微波或壓力鍋進行抗原修復,,確保使用新鮮配置的修復液?,。
三、?樣本處理不當?:
樣本存放時間過長,、切片制備不當(如脫蠟不ce底),、組織切片干片等都會影響染色效果。建議使用新鮮制備的切片,,并確保在實驗過程中保持切片濕潤?,。
四、?實驗操作問題?:孵育時間不足,、封閉不充分,、抗體稀釋比例不當?shù)炔僮鲉栴}也會導致無染色。嚴格按照驗證過的實驗步驟進行操作,,確保每個步驟都正確執(zhí)行?,。
五、?試劑問題?:
試劑過期,、試劑保存不當或試劑質(zhì)量不佳都會影響染色效果,。使用前檢查試劑的有效期和保存條件,確保試劑質(zhì)量?,。
六,、透化:
抗體和緩沖液在組織切片中的透化不足。建議在緩沖液中使用0.5%~1%Triton,。
?解決IHC未染色或無信號的建議?:
1.?確認抗體兼容性?:使用與一抗種屬匹配的二抗,,確認二抗是否識別一抗的亞型。
2.?優(yōu)化抗原修復?:使用微波或壓力鍋進行抗原修復,,確保使用新鮮配置的修復液,。
3.?正確處理樣本?:使用新鮮制備的切片,確保在實驗過程中保持切片濕潤,,避免干片,。
4.?嚴格操作步驟?:嚴格按照驗證過的實驗步驟進行操作,確保每個步驟都正確執(zhí)行。
5.?檢查試劑質(zhì)量?:使用前檢查試劑的有效期和保存條件,,確保試劑質(zhì)量,。
通過以上方法,可以有效解決IHC實驗中未染色或無信號的問題,,提高實驗的成功率和準確性,。
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