大腸桿菌表達外源蛋白，在超聲破碎的時候,，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮,，然后超聲的效果較好,，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對其他的一些細菌同樣起作用,。
   細菌沉淀直接加樣品1buffer,，再加5ul的巰基乙醇，混勻,，離心,，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min,將染色液換成大量的水在微波爐煮10min 就可以.

   在表達重組蛋白后超聲波破碎細胞,，采用冰浴,，400w，破2s停1s,，但是不一會就產(chǎn)生大量泡沫,，影響了超聲波細胞破碎儀破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣,，zui后都是破碎不*,，而的目的蛋白就在這些未破碎的細胞中。

1,、會產(chǎn)生氣泡是因為你的探頭位置沒放好,。探頭一定要接近底部，約1cm,。功率根據(jù)超聲波細胞破碎不同會有所不同,，但你可以觀察液面，有波動但不要太劇烈就好,。

2,、破3S停10S，破個二三十次看看,。 
3,、變幅桿位置擺放也要注意，聽聲音如果不對的話就要及時調(diào)整,。另外可以從菌濃度方面考慮,。在破碎時試著加大體積,強度不要超過60%. 

4、嘗試超8s停8s,對有些菌體蛋白來說,，你的方法很難散熱,，導致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，停頓時間稍長一些,，這種情況多見于包涵體形式的蛋白,。
鏈霉菌超聲破碎的，用的方法條件是什么,？
    1,、取細菌的24 h培養(yǎng)液于5000r／min下離心5 min收集菌體
    2、用pH 7．5的Na2HPO-NaH2PO 緩沖液洗滌3次,，再用該緩沖液將菌體配成1：3的菌懸液．置于40 mL大塑料試管內(nèi)
    3,、將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波破碎（功率200 W,，1／2”探頭,，破碎30 s,，間歇30 S）
    4、破碎液于12 000 r／min下高速冷凍離心30 min,，收集細胞碎片和上清夜．
    超聲破菌流程與上述基本一致,，就是洗滌菌體也可以用預冷的生理鹽水或pH8的Tris－HCl，洗滌一次就可以,。另外超聲劑量隨樣品量,、菌體改變比較大，超聲波細胞破碎儀的功率可以到400－600w,，超5s,，停5s，冰浴,，要加終濃度1 mM的PMSF,。為確定合適的超聲強度和次數(shù)，有必要隨時鏡檢觀察菌體是否*破碎,。放線菌屬于原核生物系統(tǒng)進化樹上的摩爾百分含量高的革蘭氏陽性菌分枝類群,，它雖然具有原核生物*的分子生物學特性，但在其不同類群中,，細胞壁的化學組分變化大
    在做大腸桿菌超聲時,，采用的是400W，超5停5的方法,，效果不錯,，但是用在鏈霉菌上，似乎沒什么效果,。會不會就是由于細胞壁組成差異造成的呢,，因為大腸桿菌式屬于革蘭氏陰性菌的。
    再有鏡檢是檢驗破碎效果,但是細胞破碎程度和我需要的酶獲得之間有正比關系嗎,？破碎時間長也會影響到酶的活性,。所以想問問anaisai戰(zhàn)友，你提供的“功率200 W,，1／2”探頭,，破碎30 s，間歇30 S”的條件好像是用于破碎鏈霉菌孢子的,，也可以用于發(fā)酵離心后的菌泥嗎,？如果可以，你破碎的全程時間大概是多少呢,？ 
    如果你需要的是胞內(nèi)酶，細胞破碎程度和需要的酶獲得之間基本上有正比關系,。破碎時間長的確會影響到酶的活性,。這就需要在*的破碎時間和酶活性之間做出判斷，zui直接的辦法是先繪制相關曲線。
我的實驗中,，破碎的是棒狀桿菌,，破碎時間控制在30min左右，酶活較好,。
如果是基質(zhì)菌絲的話,好可以考慮用溶菌酶處理一下,。
一般來講這幾種方法讀可以的:
一,液氮研磨
二,用french press破碎
三，超聲波破碎
四,，溶菌酶處理預處理
為什么用塑料大試管,玻璃的不可以嗎,？
答：不可以的。那么先讓我來解釋一下超聲波細胞粉碎儀超聲破碎的原理吧,。
    超聲波是物質(zhì)介質(zhì)中的一種彈性機械波,，它既是一種波動形式,又是一種能量形式。超聲對細胞的作用主要有熱效應,，空化效應和機械效應,。熱效應是當超聲在介質(zhì)中傳播時，摩擦力阻礙了由超聲引起的分子震動,，使部分能量轉(zhuǎn)化為局部高熱,。空化效應是在超聲照射下，生物體內(nèi)形成空泡，隨著空泡震動和其猛烈的聚爆而產(chǎn)生出機械剪切壓力和動蕩,。另外,，空化泡破裂時產(chǎn)生瞬時高溫高壓，可使水蒸氣熱解離產(chǎn)生.OH自由基和.H原子,，由.OH自由基和.H原子引起的氧化還原反應可導致多聚物降解、酶失活、脂質(zhì)過氧化和細胞殺傷,。機械效應是超聲的原發(fā)效應，超聲波在傳播過程中介質(zhì)質(zhì)點交替地壓縮與伸張構(gòu)成了壓力變化,，引起細胞結(jié)構(gòu)損傷,。損傷作用的強弱與超聲的頻率和強度密切相關。所以如果使用玻璃管,，可能會碎裂,，而通常使用的是塑料試管。 

    100g大腸桿菌溶于1L破碎液里,，攪拌發(fā)現(xiàn)菌液發(fā)粘,，菌體不能夠很好分散，用超聲波細胞粉碎儀破碎,，加壓后,，菌液不能進入勻質(zhì)機,，速度很慢，請問是何原因,？能有好的辦法解決,，很好用勻質(zhì)機快速破碎菌體？ 

   答：將破碎液的量加大,，不能很好分散可能是量太大 ,，超聲處理5－10分鐘，菌液粘度即可大大降低,，也可促進菌體分散,。不同型號的超聲波細胞破碎儀功率不一樣，功率的大小決定了使用變幅桿的大小范圍,，你使用多大的變幅桿就在設備的上調(diào)至該刻度,！變幅桿的大小決定了處理量5ml一下選3mm，5～50ml可選6～8mm,，50ml以上選10mm的變幅桿,，依此類推！
酵母破碎的問題

   答：一般的PROTOCOL都是用超聲波細胞破碎儀破碎酵母細胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做過的方法中還是玻璃珠,，效率很高,，而且對目的蛋白活性不會有什么影響。一般應該用這個方法,。 化學裂解的方法,，10g酵母 加1ml的乙酸乙酯，充分攪拌至液體狀,。此法的裂解效果不錯的加尿素裂解液,，在破碎遇到的問題是菌體濃度太低，OD620nm在4-6之間,。細胞破碎儀的zui低破碎體積為4ml左右,，這樣我再稀釋一倍，我懷疑破碎完溶出蛋白和酶活測定時會測不準,。破碎后,，你可將液體放入透析袋中濃縮
文章由順流超聲波細胞破碎儀提供