細(xì)胞污染是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的問(wèn)題,，它會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,。以下是細(xì)胞污染的主要原因和相應(yīng)的處理方法：

一,、細(xì)胞污染的原因
1. 操作環(huán)境不潔凈
   -空氣因素：細(xì)胞培養(yǎng)室的空氣質(zhì)量差是導(dǎo)致污染的常見(jiàn)因素之一,。如果沒(méi)有安裝高效空氣過(guò)濾器（HEPA）,，外界空氣中的微生物（如細(xì)菌、真菌孢子）就容易進(jìn)入培養(yǎng)環(huán)境,。此外,，人員頻繁進(jìn)出培養(yǎng)室,、通風(fēng)系統(tǒng)不完善等也會(huì)增加空氣中微生物的含量。
  - 臺(tái)面和儀器設(shè)備：細(xì)胞培養(yǎng)操作通常在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行,，但如果超凈工作臺(tái)的濾網(wǎng)長(zhǎng)時(shí)間未更換,、紫外燈殺菌不che底或者操作臺(tái)面在使用前未進(jìn)行充分清潔和消毒，表面殘留的微生物就會(huì)污染細(xì)胞,。另外,，培養(yǎng)箱、離心機(jī)等儀器設(shè)備內(nèi)部如果沒(méi)有定期清潔和消毒,，也會(huì)成為污染源,。
2. 實(shí)驗(yàn)用品污染
  - 培養(yǎng)基和試劑：培養(yǎng)基的原材料、配制過(guò)程或者儲(chǔ)存條件不當(dāng)都可能導(dǎo)致污染,。例如,，使用了過(guò)期的試劑、培養(yǎng)基在配制后沒(méi)有及時(shí)滅菌或者滅菌不che底,，就會(huì)引入細(xì)菌,、真菌等微生物。此外,，血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的添加成分,，血清來(lái)源的動(dòng)物如果本身攜帶病原體，也會(huì)污染培養(yǎng)基,。
   - 耗材：培養(yǎng)瓶,、移液管、離心管等耗材在生產(chǎn)過(guò)程中如果沒(méi)有經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，可能會(huì)帶有微生物,。或者在使用前,，這些耗材沒(méi)有進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚?，如高溫滅菌、環(huán)氧乙烷滅菌等,，也會(huì)造成污染,。 3. 細(xì)胞來(lái)源污染
  - 從其他實(shí)驗(yàn)室獲取的細(xì)胞株如果沒(méi)有經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)，可能本身就攜帶微生物或者病毒,。另外,，在原代細(xì)胞分離過(guò)程中，如果取材的組織或器官?zèng)]有進(jìn)行che底的消毒處理,，也會(huì)將外界的污染物引入細(xì)胞培養(yǎng)體系,。
4. 操作人員操作不當(dāng)
  - 無(wú)菌操作意識(shí)不足：操作人員沒(méi)有嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范是導(dǎo)致細(xì)胞污染的重要人為因素。例如,，在打開(kāi)培養(yǎng)瓶,、移液等操作過(guò)程中,，沒(méi)有在酒精燈火焰附近進(jìn)行，使微生物有機(jī)會(huì)進(jìn)入培養(yǎng)體系,；或者操作時(shí)雙手沒(méi)有進(jìn)行充分消毒,，將手上的細(xì)菌或真菌帶入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。
  - 交叉污染：在同時(shí)處理多種細(xì)胞株時(shí),，如果沒(méi)有更換移液器槍頭,、沒(méi)有對(duì)使用的工具（如鑷子、剪刀）進(jìn)行充分消毒,，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞株之間的交叉污染,，使一種細(xì)胞株中的微生物傳播到另一種細(xì)胞株中。

二,、細(xì)胞污染的處理方法
1. 細(xì)菌污染處理
  - 觀察和判斷：細(xì)菌污染通常比較容易觀察到,，在顯微鏡下可以看到細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁，有大量的細(xì)菌在游動(dòng),。污染的細(xì)胞形態(tài)可能會(huì)發(fā)生改變,，如細(xì)胞腫脹、破裂等,。
  - 處理措施：一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染,，最hao的做法是立即丟棄受污染的細(xì)胞和培養(yǎng)基，以防止細(xì)菌傳播到其他培養(yǎng)細(xì)胞,。如果細(xì)胞非常珍貴,，可以嘗試使用抗生素進(jìn)行處理，但成功率較低,。首先要確定污染的細(xì)菌種類(lèi),，通過(guò)革蘭氏染色等方法初步判斷是革蘭氏陽(yáng)性菌還是革蘭氏陰性菌，然后選擇針對(duì)性的抗生素,。例如，對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性菌,，可以使用青霉素,、鏈霉素等；對(duì)于革蘭氏陰性菌,，可以使用慶大霉素,、卡那霉素等。將抗生素加入到新鮮的培養(yǎng)基中,，按照合適的濃度（一般根據(jù)抗生素的說(shuō)明書(shū)和經(jīng)驗(yàn)確定）和細(xì)胞一起培養(yǎng),，觀察細(xì)胞狀態(tài)是否有所改善。
2. 真菌污染處理
  - 觀察和判斷：真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀的菌絲或者圓形的酵母菌,。受污染的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)表面可能會(huì)出現(xiàn)白色,、黑色或綠色的菌斑,，培養(yǎng)基也可能會(huì)變色。
  - 處理措施：和細(xì)菌污染類(lèi)似,，一般建議直接丟棄受污染的細(xì)胞和培養(yǎng)基,。如果要嘗試挽救，可使用抗真菌藥物,，如兩性霉素B,、氟康唑等。將藥物加入到新鮮培養(yǎng)基中,，不過(guò)真菌污染比細(xì)菌污染更難處理,，挽救成功的概率較低。
3. 支原體污染處理
  - 觀察和判斷：支原體污染比較難以察覺(jué),，因?yàn)橹гw體積很小,，在普通顯微鏡下不容易觀察到。但是支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng),、代謝和基因表達(dá)等,。可以通過(guò)專(zhuān)門(mén)的支原體檢測(cè)試劑盒（如PCR檢測(cè)試劑盒,、熒光染色檢測(cè)試劑盒等）來(lái)確定是否存在支原體污染,。
  - 處理措施：如果檢測(cè)到支原體污染，有幾種處理方法,。一種是使用抗生素,，如環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素等,，將其加入培養(yǎng)基中處理一段時(shí)間,。另一種是采用物理方法，如將細(xì)胞在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)代,，然后反復(fù)凍融細(xì)胞,，使支原體失去活性。還可以使用專(zhuān)門(mén)的支原體清除試劑來(lái)處理細(xì)胞,。
4. 交叉污染處理
  - 觀察和判斷：如果細(xì)胞形態(tài),、生長(zhǎng)特性等突然發(fā)生改變，或者在進(jìn)行基因表達(dá)分析等實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的基因特征與預(yù)期不符,，就可能存在交叉污染,。
  - 處理措施：如果懷疑有交叉污染，首先要停止細(xì)胞的使用,，然后通過(guò)細(xì)胞鑒定技術(shù)（如短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）分析,、染色體核型分析等）來(lái)確定細(xì)胞的真實(shí)身份。如果確實(shí)發(fā)生了交叉污染,，最好重新獲取正確的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng),。