一、準(zhǔn)備工作

1. 選擇合適的生物指示劑

• 根據(jù)滅菌物品的性質(zhì)和滅菌工藝要求,，選擇含有合適微生物的生物指示劑,。通常環(huán)氧乙烷滅菌生物指示劑含有枯草芽孢桿菌黑色變種（ATCC 9372）芽孢，這種芽孢對環(huán)氧乙烷的耐受性較強,，能有效反映滅菌效果,。

• 同時，要考慮生物指示劑的包裝形式,，如自含式生物指示劑（內(nèi)部包含菌片,、培養(yǎng)液和培養(yǎng)容器）和非自含式生物指示劑（菌片和培養(yǎng)液分開），根據(jù)實際使用場景和便捷性進(jìn)行選擇,。

2. 檢查生物指示劑完整性

• 仔細(xì)查看生物指示劑的包裝,，確保包裝沒有破損、裂縫或其他損壞跡象,。如果包裝損壞,，可能會導(dǎo)致芽孢失活或者受到污染,，從而影響監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

二,、放置生物指示劑

1. 確定放置位置

• 對于滅菌物品,，將生物指示劑放置在最難滅菌的部位。例如,，在滅菌復(fù)雜的醫(yī)療器械套裝時,，要將生物指示劑放置在器械的內(nèi)部通道、關(guān)節(jié)處或多層包裝的中心位置,。如果是多孔物品,，要確保生物指示劑位于物品的內(nèi)部孔隙中，以模擬環(huán)氧乙烷氣體最難穿透的情況,。

• 對于大型滅菌設(shè)備,，如環(huán)氧乙烷滅菌柜，若滅菌物品較多且分布在不同層次和位置,，應(yīng)在不同的位置放置生物指示劑,，包括上層、中層,、下層,，以及靠近柜門和后壁等位置，以全面監(jiān)測滅菌效果,。一般來說,，每一個滅菌批次至少要放置一個生物指示劑。

三,、進(jìn)行滅菌操作

1. 按照正常滅菌程序操作

• 將放置好生物指示劑的滅菌物品放入滅菌設(shè)備,，然后按照既定的環(huán)氧乙烷滅菌參數(shù)進(jìn)行滅菌。這些參數(shù)通常包括環(huán)氧乙烷濃度（一般為 450 - 1200mg/L）,、溫度（37 - 63℃）,、相對濕度（40% - 80%）和時間（1 - 6 小時不等，具體取決于滅菌條件和物品性質(zhì)）,。

四,、培養(yǎng)生物指示劑

1. 滅菌后取出

• 滅菌過程結(jié)束后，等待滅菌設(shè)備內(nèi)的環(huán)氧乙烷氣體充分排出,，壓力降至零,，然后打開滅菌設(shè)備，小心取出生物指示劑,。在取出過程中,，要避免生物指示劑受到二次污染。

2. 進(jìn)行培養(yǎng)

• 自含式生物指示劑：如果是自含式生物指示劑,，按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作,，通常是通過擠壓或折斷某個部位,，使菌片與培養(yǎng)液接觸，然后將生物指示劑放入專用的培養(yǎng)設(shè)備中,。培養(yǎng)溫度一般設(shè)定為 30 - 37℃,，這是枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢能夠生長的適宜溫度。培養(yǎng)時間通常為 24 - 72 小時,，具體時間根據(jù)生物指示劑的說明書確定。

• 非自含式生物指示劑：對于非自含式生物指示劑,，將菌片放入合適的培養(yǎng)液中,，培養(yǎng)液要含有芽孢生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，如碳源,、氮源,、無機鹽等，并且要具備指示芽孢是否生長的功能（如含有酸堿指示劑）,。將裝有菌片和培養(yǎng)液的容器放入培養(yǎng)設(shè)備,，培養(yǎng)條件同自含式生物指示劑。

五,、結(jié)果判斷

1. 陽性結(jié)果判斷

• 如果在培養(yǎng)規(guī)定時間后,，生物指示劑中的培養(yǎng)液顏色發(fā)生變化（如由紫色變?yōu)辄S色），并且有微生物生長的跡象（如培養(yǎng)液變渾濁）,，則判定為陽性結(jié)果,。這表明滅菌不徹di，滅菌過程失敗,。

2. 陰性結(jié)果判斷

• 如果培養(yǎng)后,，生物指示劑中的培養(yǎng)液顏色保持不變（如仍為紫色），且沒有微生物生長的跡象（培養(yǎng)液清澈）,，則判定為陰性結(jié)果,。這意味著滅菌有效，達(dá)到了預(yù)期的滅菌效果,。

3. 記錄和報告結(jié)果

• 將生物指示劑的測試結(jié)果詳細(xì)記錄下來,，包括滅菌批次、滅菌日期,、培養(yǎng)日期,、結(jié)果（陽性或陰性）等信息。如果出現(xiàn)陽性結(jié)果,，需要及時報告相關(guān)部門,，并對滅菌設(shè)備和滅菌過程進(jìn)行檢查和重新評估，以確定滅菌失敗的原因并采取糾正措施,。