薄層色譜分析(TLC)是快速分離分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),，主要用于藥品的鑒別,、 雜質(zhì)檢查，也用于跟蹤化學(xué)反應(yīng)進(jìn)程,。

薄層色譜法基本原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法,，它利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力不同，使在流動(dòng)相（溶劑）流過(guò)固定相（吸附劑）的過(guò)程中,，連續(xù)地產(chǎn)生吸附,、解吸附、再吸附、再解吸附,，從而達(dá)到各成分互相分離的目的,。

薄層色譜法基本原理

薄層色譜法經(jīng)典操作

01 點(diǎn)樣

點(diǎn)樣一般為圓點(diǎn)（不能太大）點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊0.5~1.0 cm，點(diǎn)樣直徑為1-2 mm 點(diǎn)間距離約為0.5~1.0 cm,，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜,；

02 展開(kāi)

1、化合物分離效率大小用 Rf（化合物距離基線(xiàn)的距離除以溶劑的前沿距基線(xiàn)的距離 ）值表達(dá),，Rf值最-好在0.15~0.85之間,，盡量控制主要物質(zhì)Rf值在0.3~0.7之 間。

2,、展開(kāi)劑的選擇：常用的溶劑組合有：石油醚/乙酸乙酯,、二氯甲烷/甲醇、石油醚/丙酮,、石油醚/二氯甲烷,、乙酸乙酯/甲醇、乙酸乙酯/四氫呋喃,、氯仿/乙酸乙酯 ,、乙睛/水等。

03 顯色

遵循：一看,、二照,、三碘、四顯,。首先在日光下觀(guān)察,，劃岀有色物質(zhì)的斑點(diǎn)位置； 在紫外燈下觀(guān)察有無(wú)暗斑或熒光斑點(diǎn),；紫外吸收很弱的物質(zhì),，可以用碘缸進(jìn)行顯色 無(wú)色又無(wú)紫外吸收且在碘缸中不顯色的物質(zhì)，可以根據(jù)化合物的顯色基團(tuán)選擇顯色劑顯色,。

薄層色譜法案例分析

01 薄層色譜法TLC拖尾現(xiàn)象

① 首先考慮的是樣品濃度過(guò)大,，硅膠板過(guò)載導(dǎo)致。這種情況直接降低樣品濃度或者減少上樣量,。

② 樣品對(duì)硅膠的吸附能力過(guò)強(qiáng)導(dǎo)致的拖尾,。對(duì)不同體系加入不同的調(diào)節(jié)劑，酸體系加冰醋酸,，堿體系加氨水/三乙胺,。

薄層色譜法TLC拖尾現(xiàn)象

02 薄層色譜法TLC邊緣效應(yīng)

原因：當(dāng)展開(kāi)劑在薄層上展開(kāi)時(shí)，極性較弱的展開(kāi)劑和揮發(fā)較強(qiáng)的展開(kāi)劑在薄層兩邊較易揮發(fā),，它們?cè)诒觾蓚?cè)的濃度比在中部的濃度小,，因此產(chǎn)生了邊緣效應(yīng),。

解決方案：點(diǎn)樣時(shí)，板子兩邊空出0.5 cm邊際

03 薄層色譜法TLC分離效果差

原因：分離效果差的主要原因包括展開(kāi)劑的選擇,、展開(kāi)方式以及實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件,。

解決方案：根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇合適極性/體系的展開(kāi)劑；避免點(diǎn)樣過(guò)量或不均勻,；優(yōu)化展開(kāi)方式,，選擇最-適合的上行或下行展開(kāi)方式；控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫濕度,，確保硅膠不吸潮,。

04 薄層色譜法TLC樣品跑散/沖頂

原因：可能是樣品中有大極性溶劑、展開(kāi)劑極性太大,、硅膠板吸潮,。

解決方案：在點(diǎn)板前，先用吹風(fēng)機(jī)將硅膠板吹干,，點(diǎn)樣后,，再將樣品溶劑吹干，選用極性適合的展開(kāi)劑,。

原因：可能包括展開(kāi)劑選擇不佳,、樣品濃度過(guò)低、顯色劑選擇不當(dāng)?shù)取?/span>

解決方案：

① 展開(kāi)劑選擇不佳,，可能導(dǎo)致斑點(diǎn)重合或不明顯,。可嘗試不同類(lèi)型,、比例的展開(kāi)劑,，多次嘗試以找到最-佳的展開(kāi)劑組合。

② 調(diào)整樣品的濃度,，以便在薄層色譜板上形成更明顯的斑點(diǎn),。

③ 選擇正確的顯色劑對(duì)樣品的顯色起到至關(guān)重要的作 用，如含氮（伯,、仲）化合物選用茚三酮顯色劑,，含還原性基團(tuán)化合物（羥基、氨基 ,、醛）選用高猛酸鉀顯色劑,，生物堿選擇硫酸鈰顯色劑等。

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