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超實(shí)用干貨(三) | 液相色譜柱使用壽命常見(jiàn)提問(wèn)與解決方法

來(lái)源:浙江福立分析儀器有限公司   2024年10月28日 16:48  

超實(shí)用干貨(三) | 液相色譜柱使用壽命常見(jiàn)提問(wèn)與解決方法



液相色譜柱是高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)中的關(guān)鍵組成部分,,其使用壽命直接影響分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,。以下是一些關(guān)于液相色譜柱使用壽命的常見(jiàn)問(wèn)答:



Q
我的色譜柱只能進(jìn)樣大約100針。100針之后,,峰型會(huì)畸變,塔板數(shù)也會(huì)變得非常低,。這是什么原因呢,?
A

100針之后就峰型畸變,塔板數(shù)非常低,不能繼續(xù)使用,,這個(gè)壽命確實(shí)很短,。在正常情況下,液相色譜柱的使用時(shí)間會(huì)更長(zhǎng)一些,。這類壽命短有以下兩種情況:


(1)以前用于相同檢測(cè)的色譜柱壽命比現(xiàn)在這個(gè)色譜柱的壽命長(zhǎng),。此種情況下,可以探究一下該實(shí)驗(yàn)是否所有條件真的都保持不變,。

① 樣品組成是否已改變,?因?yàn)槿绻麡悠分行乱肓藦?qiáng)吸附的污染物就會(huì)破壞色譜柱的性能。


② 儀器流體路徑上的密封件是否狀況良好,?因?yàn)槊撀涿芊馑樾紩?huì)堵塞柱入口的篩板和填料,,從而導(dǎo)致柱壓升高,色譜柱性能被損壞,。


(2)用于此樣品檢測(cè)的所有色譜柱的壽命均這么短,。實(shí)驗(yàn)人員可以確定色譜條件沒(méi)有變化。

① 色譜柱填充床的機(jī)械弱點(diǎn),。這可能是由于在實(shí)驗(yàn)室里對(duì)柱子的存放不得當(dāng)導(dǎo)致的,,比如摔打過(guò)或者碰撞過(guò)?這種問(wèn)題一般只有在使用之后才能顯示出來(lái),。


② 色譜條件不科學(xué),。可能是色譜條件中的流動(dòng)相對(duì)色譜柱填料不友好,需要優(yōu)化色譜條件或者重新篩選色譜柱,。比如流動(dòng)相水相比例>90%,,這需要選擇可以耐受純水相的鍵合相的色譜柱;比如流動(dòng)相的pH≤2,,這需要用耐酸的鍵合相的色譜柱,;比如流動(dòng)相的pH≥10,則需要用耐堿的鍵合相的色譜柱,。




Q
色譜柱的運(yùn)輸和儲(chǔ)存都是規(guī)范的,,并且流動(dòng)相的水相比例不高,pH也在2-10之間,,但是我的色譜柱總是只能用很短的一段時(shí)間,,200針勉強(qiáng)能接受,100針就讓人不能接受了,,因?yàn)檫@樣檢測(cè)成本就太高了,。這種情況是什么原因?qū)е碌哪兀课夷茏鍪裁礃拥膬?yōu)化嗎,?
A

我同意您的觀點(diǎn),。我們需要做的是找到造成色譜柱壽命短的原因,,然后看看,我們能做些什么優(yōu)化措施,。


造成壽命短問(wèn)題最可能的原因是色譜柱的入口端樣品成分的吸附,。它們可能因?yàn)樵诹鲃?dòng)相中的低溶解度而沉淀,也可能被強(qiáng)吸附,。當(dāng)你注入的樣品越來(lái)越多時(shí),,這些污染物會(huì)堆積在色譜柱入口端,這樣就阻礙了樣品的正常吸附和分布,,就導(dǎo)致了峰型畸變,。這個(gè)問(wèn)題通常也會(huì)伴隨著色譜柱背壓的增加。有以下幾種方法可以防止這種情況的發(fā)生:

(1)優(yōu)化樣品的前處理步驟,。

采用SPE固相萃取小柱等具有類似化學(xué)性質(zhì)的樣品前處理耗材處理樣品來(lái)優(yōu)化,。


(2)更有效的方法是使用保護(hù)柱。

分析色譜柱的入口端作為最易損壞的部分,,在分析色譜柱的前端加裝一根保護(hù)柱來(lái)代替分析柱入口端被損壞,,通過(guò)這樣的方式來(lái)延長(zhǎng)分析色譜柱的使用壽命為了使分析柱獲得最佳性能,,您需要使用一個(gè)與分析柱填料和粒徑相同的保護(hù)柱,。如果使用的保護(hù)柱的粒徑更大,會(huì)導(dǎo)致色譜峰型展寬以及分離度變差,。




Q
除了優(yōu)化樣品前處理和使用保護(hù)柱以外,,是否還有其他解決方法呢?
A

確實(shí)還有其他的解決方法,,但它們都存在一些缺點(diǎn),。


(1)可以用溶劑來(lái)“清洗”色譜柱,這些溶劑應(yīng)該可以溶解色譜柱入口端的污染物,。但是在許多情況下,,這個(gè)過(guò)程根本不起作用 。

例如,,如果污染物是沉淀在色譜柱入口端的密封圈碎屑,,根本不可能溶解它們。此外,,每次洗滌也會(huì)讓鍵合相有水解的風(fēng)險(xiǎn),,因此重復(fù)的洗滌實(shí)際上會(huì)導(dǎo)致色譜柱的加速老化。并且,,在洗滌之后,,你必須用流動(dòng)相重新平衡你的色譜柱,這也是相當(dāng)耗時(shí)的,。


(2)還有一種經(jīng)常嘗試的方法是反向“再生”色譜柱,。它需要用不同的溶劑切換沖洗色譜柱,需要很多時(shí)間,,直到污染物被去除,,或者它可能根本除去不了污染物。






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