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人白細(xì)胞介素2（IL-2）Elisa試劑盒定性說明書

來源：上海彩佑實(shí)業(yè)有限公司 2012年05月07日 08:15

人白細(xì)胞介素2（IL-2）Elisa試劑盒定性說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

96T

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素-2（IL-2）表達(dá),。

實(shí)驗(yàn)原理

人白細(xì)胞介素2（IL-2）Elisa試劑盒定性說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白細(xì)胞介素-2（IL-2）表達(dá),。用純化的人白細(xì)胞介

素-2（IL-2）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，可與樣品中白細(xì)胞介素-2（IL-2）相結(jié)合,，

經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的白細(xì)胞介素-2（IL-2）抗體結(jié)合,，

形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催

化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光

度（OD 值）,，與CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中人白細(xì)胞介素-2（IL-2）的存在與否。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔,、陽性對照2 孔、空白對照1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不

觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此

重復(fù)5 次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止

液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為白細(xì)胞介素-2（IL-2）陰性

陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為白細(xì)胞介素-2（IL-2）陽性

,。

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

5．底物請避光保存,。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸,，使用時必須

注意安全,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6 個月人白細(xì)胞介素2（IL-2）Elisa試劑盒定性說明書

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