核心提示：潔凈室（無菌室）是微生物檢測的重要場所與最基本的設施,。它是微生物檢測質(zhì)量保證的重要物質(zhì)基礎,。因此它的設計要按國家標準《潔凈廠房設計規(guī)范》,、國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《藥 品檢驗所實驗室質(zhì)量管理規(guī)范（試行）》中第十八條規(guī)定執(zhí)行,。微生物實驗室潔凈室的施工,、安裝,、驗收應按國家行業(yè)標準《潔凈室的施工及驗收規(guī)范》執(zhí)行,。對于微生物檢測工作者和使用管理者來講,，更大量的工作是進行正常管理到日常的使用,。潔凈室（無菌室）的標準要符合GMP潔凈度標準要求。

潔凈室（無菌室）的使用管理要做到以下工作：

1,、潔凈室（無菌室）要符合規(guī)范要求：無菌室應采光 良好,、避免潮濕、遠離廁所及污染區(qū),。面積一般不超過10m2,，不小于5m2；高度不超過2.4m,。由1—2個緩沖間,、操作間組成（操作間和緩沖間的門不應直對），操作間和緩沖間之間應具備滅菌功能的樣品傳遞箱,。在緩沖間內(nèi)應有洗手盆,、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤,、拖鞋等,，不應放置培養(yǎng)箱和其他雜物；無菌室內(nèi)應六面光滑平整,，能耐受清洗消毒,。墻壁與地面、天花板連接處應呈凹弧形,，無縫隙,，不留死角。操作間內(nèi)不應安裝下水道,。

無菌操作室應具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置,，操作區(qū)潔凈度100級或放置同等級別的超凈工作臺，室內(nèi)溫度控制18—26℃,，相對濕度45%—65%,。緩沖間及操作室內(nèi)均應設置能達到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5Pa,，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差大于10Pa,。無菌室內(nèi)的照明燈應嵌裝在天花板 內(nèi),，室內(nèi)光照應分布均勻,，光照度不低于300lx,。緩沖間和操作間所設置的紫外線殺菌燈（2—2.5w/m3），應定期檢查輻射強度,，要求在操作面上達40uw/m2,。不符合要求的紫外殺菌燈應及時更換。

 2,、建立使用登記制度

在登記冊中可設置以下項目內(nèi)容：如使用日期,、時間、使用人,、設備運行狀況,、溫度、濕度,、潔凈度狀態(tài)（沉降菌數(shù),、浮游菌數(shù)、塵埃粒子數(shù) ）,、報修原因,、報修結果、清潔工作（臺面,、地面,、墻面、天花板,、傳遞窗,、門把手）、消毒液名稱等,。

3,、建立使用標準操作規(guī)范（SOP）并嚴格管理:SOP內(nèi)容至少要有以下幾點：

（1）規(guī)定凈化系統(tǒng)使運轉(zhuǎn)時間要求每次實驗前應開啟凈化系統(tǒng)使運轉(zhuǎn)至少1h以上，同時開啟凈化臺和紫外燈,。

（2）物品進入潔凈室（無菌室）基本要求：凡進入潔凈室（無菌室）的物 品必須先在第一緩沖間內(nèi)對外部表面用消毒劑消毒滅菌,，再經(jīng)物流緩沖間、傳遞窗1h以上,，及無菌空氣吹干后送入無菌室,。注意帶纖維、易發(fā)塵物品不得帶進凈化實驗室,。無菌室內(nèi)固定物品不得任意搬出,。

（3）人員進入潔凈室（無菌室）要求：實驗人員進入潔凈室（無菌室）不得化妝、帶手表,、戒指等首飾,；不得吃東西,、嚼口香糖。應清潔手后進入第一緩沖間更衣,，同時換上消毒隔離拖鞋,，脫去外衣，用消毒液消毒雙手后戴上無菌手套,，換上無菌連衣帽（不得讓頭發(fā),、衣等暴露在外面），戴上無菌口罩,。然后,，換或是再戴上第二副無菌手套，在進入第二緩沖間時換第二雙消毒隔離拖鞋,。再經(jīng)風淋室30s風淋后進入無菌室,。

（4）溫濕度觀察要求：觀察溫度計、濕度計上顯示的溫濕度是否在規(guī)定的范圍內(nèi),，并作為實驗原始數(shù)據(jù)記錄在案,。如發(fā)現(xiàn)問題應及時尋找原因，及時報修和及時報告實驗室主管,，并將報修原因和結果記錄歸檔,。

（5）沉降菌落計數(shù)與浮游菌測定要求：在每次實驗同時，對操作室和層流臺做微生物沉降菌落計數(shù),，將結果記錄在使用登記本上,，并作為實驗環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實驗報告上。每周1次,，或在無菌檢查等必要時,，在每次實驗同時對操作室和凈化臺進行浮游菌測定，將結果記錄在使用登記本上,，并作為實驗環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實驗報告上,。

（6）消毒要求：無菌室每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液（常用消毒劑的品種有：5—20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%新潔爾滅溶液,、1：50的84消毒液,、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液,、5%石炭酸（來蘇兒）消毒溶液,、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（處方：對羥基苯甲酸甲酯21.5g,；對羥基苯甲酸丙酯8.6g,，75%乙醇10ml）等，所用的消毒劑品種與使用要進行有效性驗證方可使用,，并定期更換消毒劑的品種）擦拭操作臺及可能污染的死角,，方法是用無菌紗布浸漬消毒溶液清潔超凈臺的整個內(nèi)表面,、頂面、及無菌室,、人流,、物流、緩沖間的地板,、傳遞窗,、門把手,。清潔消毒程序應從內(nèi)向外,，從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)。逐步向外退出潔凈區(qū)域,。然后開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1—2h,，以殺滅存留微生物。在每次操作完畢,，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺面,，除去室內(nèi)濕氣，用紫外燈殺菌30min,。

（7）其他要求：如遇停電,，應立即停止實驗，離開無菌室,。關閉所有電閘,。重新進入無菌室前至少開啟機房運轉(zhuǎn)1h以上。

4,、潔凈度檢查的要求與方法：無菌室在消毒處理后,，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達到規(guī)定的潔凈度,，常有沉降菌和浮游菌測定方法,。

（1）沉降菌檢測方法及標準：以無菌方式將3個營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺面左,、中,、右各放1個；打開平板蓋,，在空氣 中暴露30min后將平板蓋好,，置32.5℃士2.5℃培養(yǎng)48h，取出檢查,，3個平板上生長的菌落數(shù)平均小于1個,。

（2）浮游菌檢測方法及標準：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機制的采樣器,，一般采用狹縫式或離心式采樣器,，并配有流量計和定時器,，嚴格按儀器說明書的要求操作并定時校檢，采樣器和培養(yǎng)皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌,，使用的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認可的其他培養(yǎng)基,。使用時，先開動真空泵抽氣,，時間不少于5min,，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤,、轉(zhuǎn)速 ,。關閉真空泵，放入培養(yǎng)皿,，蓋上采樣器蓋子后調(diào)節(jié)縫隙高度,。置采樣口采樣點后，依次開啟采樣器,、真空泵,，轉(zhuǎn)動定時器，根據(jù)采樣量設定采樣時間,。全部采樣結束后,，將培養(yǎng)皿置32.5℃士2.5培養(yǎng)48h，取出檢查,，浮游菌落數(shù)平均不得超過5個/m3,。

每批培養(yǎng)基應選定3只培養(yǎng)皿做對照培養(yǎng)。

無菌操作臺面或超凈工作臺還應定期檢測其懸浮粒子,，應達到100級（一般用塵埃粒子計數(shù)儀）檢測,，并根據(jù)無菌狀況必要時置換過濾器。

5,、定期進行潔凈度再驗證：定期（每季度,、半年、1年）或當潔凈室設施發(fā)生重大改變時,，要按國家標準GB/T16292-16294-1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子,、浮游菌和沉降菌的測試方法》進行潔凈度再驗證，以確保潔凈度符合規(guī)定,，保存驗證原始記錄,，定期歸檔保存，并將驗證結果記錄在無菌室使用登記冊上,，作為實驗環(huán)境原始依據(jù)及趨勢分析資料,。并定期對潔凈室的環(huán)境檢測數(shù)據(jù)進行趨勢分析和評估，根據(jù)評估結果，了解潔凈室設施環(huán)境質(zhì)量的穩(wěn)定狀況及變化趨勢,，決定是否有必要修訂相應的警戒和糾偏限度,。

6、定期更換新的紫外燈管,、更換凈化系統(tǒng)的初效,、中效、高效頭：定期（至少每年1次）更換新的紫外燈管,，以確保紫外燈管滅菌持續(xù)有效,。并同時在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔保存,。至少2年1次,，或按潔凈度驗證實際情況，定期更換初效,、中效,、高效頭。以確保凈化系統(tǒng)的功能持續(xù)有效,，并同時在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔保存,。

7,、使用過程中應盡可能減少人員的走動或活動：平時實驗室內(nèi)應盡可能減少人員的走動或活動，同向潔凈室的門要關閉或安裝自動閉門器使其保持關閉狀態(tài),。

8,、潔凈度不符合規(guī)定時立即停止使用：發(fā)現(xiàn)潔凈度不符合規(guī)定時，應立即停止使用,，尋找原因,，清潔、必須經(jīng)潔凈度再驗證符合規(guī)定后,，才再使用,，并同時將情況記錄在無菌室使用登記冊上，定期歸檔保存,。

9,、對進入的外來人員或維修人員進行指導和監(jiān)督：非微生物室檢驗人員不得進入潔凈室（無菌室），對必須進入的外來人員或維修人員要進行指導和監(jiān)督,。

10,、潔凈室（無菌室）的日常管理：建立安全衛(wèi)生值日制度，一旦發(fā)現(xiàn)通風系統(tǒng),、墻壁,、天花板、地面,、門窗及公用介質(zhì)系統(tǒng)等設施有損壞現(xiàn)象,，要及時報告并采取相應的修復措施,，并保存記錄及時歸檔。從潔凈室（無菌室）環(huán)境中檢測到的微生物應能鑒別至屬或種,，保留鑒別實驗原始記錄及菌種,，作為無菌生產(chǎn)、無菌檢查潔凈室環(huán)境質(zhì)量,、消毒劑有效性評估及污染源調(diào)查的依據(jù),，并且也是為無菌檢查陽性結果的調(diào)查提供第一手資料。