耗材專區(qū) | 應(yīng)用EZsep™ HMR-Lipid固相萃取柱檢測魚肉中水楊酸殘留量

來源：北京萊伯泰科儀器股份有限公司 2024年10月18日 10:16

前言

水楊酸,，分子式為C₇H₆O₃,，是植物柳樹皮提取物,，是一種天然的消炎藥。水楊酸可以殺菌,、消炎,，從而常被用于對水產(chǎn)動物體表的水霉、鰓霉的剝離分解及傷口修復(fù),，水產(chǎn)動物因紅斑,、皮膚病,、打印、赤皮,、爛尾,、潰爛、腐皮,、膚霉,、脫粘、白頭白嘴,、爛鰓,、水腫、出血等引起的多種傷口能快速愈合,。本品定期使用能有效預(yù)防和降低水產(chǎn)品發(fā)病率并快速凈化水體,，從而抑制降解水體中的各種雜菌及病原體，但長期過量使用會造成藥物在動物體內(nèi)富集,，人類食用這些水產(chǎn)品會使殘留的獸藥進(jìn)入人體,，從而影響人體健康。

本文參照《魚可食性組織中水楊酸殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(征求意見稿)》,，利用EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300mg/6mL,，貨號：PZ12624） 凈化樣品，再通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測進(jìn)行檢測,，建立了魚肉中水楊酸殘留量的分析方法。

實(shí)驗(yàn)過程

1.1 儀器與試劑

MPREP-SPE08手動固相萃取裝置,，貨號：PZ0008,，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀,，貨號：C020017,，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

4500質(zhì)譜系統(tǒng),，SCIEX公司,；

EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300 mg/6mL，貨號：PZ12624）,，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司,；

冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ,，上海安亭科學(xué)儀器廠,；

乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司,；

甲酸（分析純）,，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,。

1.2 工作液配制

水楊酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100mg/瓶，購自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心,。

水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液：取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品適量(相當(dāng)于有效成分約10mg),，精密稱定，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,，配制成濃度為1000μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液,。

水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)儲備液：濃度為100μg/mL溶劑為甲醇，購自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司,。

水楊酸標(biāo)準(zhǔn)中間液：移取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.1mL,，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)中間液,。

水楊酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：水楊酸標(biāo)準(zhǔn)中間液1.0mL,，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1.0μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)使用液,。

水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)使用液:移取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.1mL,，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1.0μg/mL的水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)使用液,。

依次移取1.0μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)使用液0,、0.02、0.05,、0.10,、0.20、0.50,、1.0mL,，分別置于10mL容量瓶中并均加入水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)使用液0.2mL，以0.1%甲酸水溶液定容至刻度,，得到濃度依次為0μg/L,、2μg/L、5μg/L,、10μg/L,、20μg/L、50μg/L,、100μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液,，水楊酸D4濃度固定為20μg/L。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

取魚肉試樣2g,，置于50mL聚丙烯離心管中,，添加水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)工作液40μL，加5%甲酸乙腈溶液10.0mL，渦旋混勻1min超聲提取10min,，10000r/min冷凍離心5min,，收集上清液5.0mL待凈化

1.3.2 固相萃取凈化

EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300 mg/6mL，貨號：PZ12624）用5mL乙腈進(jìn)行活化,，取1.3.1待凈化液上樣,，收集流出液，以E.T.氮吹濃縮儀,，40℃氮?dú)鉂饪s至近干,，加1.0mL0.1%甲酸水溶液，渦旋混勻過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定,。

1.3.1 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm,，2.1*100mm）；

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）,；

流動相：A：0.1%甲酸水溶液,；B：乙腈；

流速：0.3mL/min,。