一,、產(chǎn)品介紹 

【中文名稱】人 γδT 細胞高效擴增試劑盒 

【英文名稱】Human γδT cell robust expasion kit 

【編號】 CT-004 

【包裝規(guī)格】 2L/套

【試劑盒組成】

【預期用途】

適用于從人新鮮外周血,、濃縮白細胞來源的單個核細胞以及凍存的單個核細胞在體外擴增成 γδT 細胞,。

【貯藏條件與有效期】GD-I,，GD-II,，GD-IV 置于 2-8°C 保存,，有效期為 12 個月,；GD-III 置于-20°C 保存,， 有效期為 24 個月,，置于 2-8°C 保存，有效期則為 3 個月,，并勿反復凍融,； 生產(chǎn)日期，有效期至：見標簽,。

【產(chǎn)品特性】 γδT 細胞具有在體內(nèi)快速反應(yīng)的特性,，在受到刺激時，會先于 αβ-T 細胞釋放促炎性細胞因子 （IFN-γ 和 TNF-α 等）,。γδT 細胞能夠激活 NK 細胞的腫瘤細胞毒作用,，與 DC 細胞互刺激成熟， APC 細胞抗原呈遞的功能,，激活 αβ-T 細胞的免疫效應(yīng),，γδT 細胞的殺傷作用具有非 MHC 限制性， 廣泛的殺瘤譜,，已知對至少十幾種腫瘤細胞有殺傷作用,。 γδT 細胞在人外周血含量很少（1-5%），本產(chǎn)品能夠?qū)⑼庵苎械膯蝹€核細胞大規(guī)模擴增成 γδT 細胞,，具有擴增效率高,，目的細胞百分比高的特點,，起始單個核細胞經(jīng)過 14 天培養(yǎng),，總細胞 數(shù)可以擴增約 30±10 倍左右，γδT 細胞其純度可達 80%左右,，并且全程無血清培養(yǎng)為基礎(chǔ)和臨床 研究使用 γδT 細胞提供一個有力的產(chǎn)品,。

二、操作步驟

1. 第 0 天,，將制備好的單個核細胞（MNC）按 1.5-2.0M cells/mL 細胞密度鋪于 T-75 瓶中,，加 入 GD-IV 培養(yǎng)基 45mL，GD-I 500μL,，GD-II 100 μL,，GD-III 5mL 以及濃度為 100 萬 IU/mL 的 IL-2 50μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）,； 注意：

1）IL-2 使用 1mL GD-IV 培養(yǎng)基溶解（IL-2 溶解后濃度為 100 萬 IU/mL），存于 2-8°C 冰箱,， 存放時間不超過兩周,。建議將 IL-2 溶解后分裝于無菌試劑管后保存于-20°C 冰箱，使用時溶解 即可,，注意不要反復凍融,，且不可使用長期置于 2-8°C 的 IL-2，否則將嚴重影響本試劑盒的擴 增效果,；

2）請勿將 GD-III 從-20°C 冰箱中取出后直接置于 37°C 中,，GD-III 溶解wan全后，輕輕搖晃瓶 身,，使其溫度與成份均一,，搖晃時，請小心避免氣泡產(chǎn)生,；

  3）在細胞鋪加后與第 3 天補液之前的這段時間內(nèi),，盡可能不要移動培養(yǎng)瓶，以免使其受到溫度 變動,，震蕩等物理因素的干擾,。

2. 第 3 天（3×24h），補加 95ml GD-IV 培養(yǎng)基,，GD-III 5mL,，IL-2 100μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）轉(zhuǎn)入細胞培養(yǎng)袋，此時袋子含 150mL 培養(yǎng)液,； 注意：為使更多的細胞轉(zhuǎn)入到培養(yǎng)袋中,，可先將 T-75 瓶中的細胞吹打均勻，全部轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中,， 再用部分新鮮配制的培養(yǎng)液潤洗培養(yǎng)瓶,，并再次轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中，最后補齊培養(yǎng)液即可,；

3. 第 5 天,，往培養(yǎng)袋補加 150mL GD-IV 培養(yǎng)基，GD-III 7.5mL,，IL-2 150μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）,，此時袋子含 300mL 培養(yǎng)液；

4. 第 7 天,，往培養(yǎng)袋補加 300mL GD-IV 培養(yǎng)基,，剩余的 GD-III，IL-2 300μL（即 IL-2 終濃度 為 1000IU/mL）,，然后分成兩袋,，此時每個袋子含 300mL 培養(yǎng)液,；

5. 第 9 天，分別往培養(yǎng)袋補加 300ml GD-IV 培養(yǎng)基,，IL-2 300μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）,， 此時袋子含 1100mL 培養(yǎng)液； 注意：D5-9 為細胞增殖高峰期,，補液時注意根據(jù)細胞生長狀態(tài)和密度添加培養(yǎng)基以保持細胞良 好生長狀態(tài),。

6.第 11 天，分別往每個培養(yǎng)袋補加 400mL GD-IV 培養(yǎng)基,，IL-400μL（即 IL-2 終濃度 1000IU/mL） 

7.第 13-14 天,，收獲目的細胞。

注意事項：

1）在使用本試劑盒時,，可先將 GD-I 與 GD-II 試劑管低速離心（如 1000g/min 離心 1min 等）,， 確保試劑足量；

2）由于樣本之間的差異性,，在按上述操作說明操作時,，可根據(jù)具體細胞生長狀態(tài)，調(diào)整補液時 間,；

  3）在使用本試劑盒時,，由于樣本之間的差異性，每個樣本的細胞長速與誘導率存在差異,。

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