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人脂聯(lián)素（ADP）Elisa試劑盒使用說明書

來源：上海彩佑實(shí)業(yè)有限公司 2012年04月24日 08:38

人脂聯(lián)素（ADP）Elisa試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測(cè)范圍： 96T

30μg/L -1200μg/L

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中脂聯(lián)素（ADP）含量,。

實(shí)驗(yàn)原理

人脂聯(lián)素（ADP）Elisa試劑盒使用說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人脂聯(lián)素（ADP）水平,。用純化的人脂聯(lián)素（ADP）

抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入脂聯(lián)素（ADP）,，再與HRP

標(biāo)記的脂聯(lián)素（ADP）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物

TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏

色的深淺和樣品中的脂聯(lián)素（ADP）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），

通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人脂聯(lián)素（ADP）濃度,。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品（2400μg/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份

5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張

6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋,。

1200μg/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

600μg/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

300μg/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150μg/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

75μg/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、

待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，

然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡

量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此

重復(fù)5 次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）,。測(cè)定應(yīng)在加終止

液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間

控制在5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD 值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)

算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存,。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6 個(gè)月人脂聯(lián)素（ADP）Elisa試劑盒使用說明書

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