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植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2012年04月20日 10:55  

植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理:

用純化的赤霉素抗體包被微孔板,,制成固相載體,,往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化的赤霉素抗體、HRP標(biāo)記的親和素,,經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的赤霉素呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,,試劑不能直接在37溶解,;試劑或樣品配制時,,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡,。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,,計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1,、 加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,??瞻卓准訕悠废♂屢?100 ,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100,,注意不要有氣泡,,加樣 時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37溫育2小時,。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效
性,,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2,、 棄去液體,,甩干,不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液 100(臨用前配制),,酶標(biāo)板加上覆膜,37溫育1小時,。
3,、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,,洗板 3次,,每次浸泡1-2分鐘,大約400/每孔,,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干),。
4,、 每孔加檢測溶液
5,、 棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板5次,,方法同步驟3,。
6、 每孔加底物溶液90,,酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色(反應(yīng)時間控制在15-30分鐘,,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯時,,即可終止),。
7、 每孔加終止溶液50,,終止反應(yīng),,此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物    液的加入順序相同,。
8,、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(值)。
ELISA試劑盒樣本要求:

1,、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),,因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2,、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能立即試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3,、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒,。

注意事項(xiàng):

1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,,以減小實(shí)驗(yàn)誤差,。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度,。

5、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L,,超過此范圍,,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,,請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果(6.25-200ng/L范圍內(nèi)),,乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6,、若顯色過淺,,可適當(dāng)延長底物溫育時間。

7,、為避免交叉污染,,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,;酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,,不得碰到微孔,;不得重復(fù)使用封板膜。

8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,,不同批號的試劑不得混用。

9,、底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下。

 

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