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酶聯(lián)免疫斑點技術 (Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT) 是細胞免疫學研究中的檢測方法之一，廣泛應用于測定分泌特異性抗體或細胞因子的單個細胞對特異性抗原免疫應答能力的細胞免疫學技術,。
由于是單細胞水平檢測,，ELISPOT 比 ELISA 和有限稀釋法等具有更高的靈敏性。ELISPOT 技術可精確測量分泌細胞的比例,，達到 1/1000000 細胞的靈敏度，比傳統(tǒng)方法高2個數(shù)量級。與基于流式細胞術的細胞內染色法 (Intracellular Cytokine Staining, ICS) 相比較,，ELISPOT 技術不僅可在分泌細胞周圍持續(xù)捕獲細胞因子。同時,，在檢測細胞因子的分泌時,，不需要添加分泌抑制劑處理細胞。
ELISPOT 實驗原理
免疫細胞在刺激物存在的條件下被激活,，其分泌的細胞因子/免疫球蛋白被 ELISPOT 板底 PVDF 膜上 (預包板) 的特異性單抗捕獲,，去除細胞后，被捕獲的細胞因子與生物素標記的單抗結合,，其后二者再與堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記的親和素結合,，加入底物顯色后，PVDF 膜上有反應作用的細胞會留下直徑大小不等的染色斑點,，通過酶聯(lián)免疫斑點分析儀 (ELISPOT Reader) 對斑點進行自動計數(shù)和分析 (圖1),。
基于熒光檢測 ELISPOT 的方法 (FluoroSpot)：同樣采用夾心法原理,，96孔板的 PVDF 膜上同時包被多種不同因子的捕獲抗體，細胞經過刺激培養(yǎng)后,，分泌的細胞因子被板底的捕獲抗體所捕獲,，再同時加入兩個檢測抗體，其中一種檢測抗體帶上 Tag 標簽,，另一種檢測抗體帶 Biotin 標簽,，最后加入 anti-tag 和 Streptavidin 標記的熒光素進行標記。儀器中含有濾光片,，可以精確的檢測到目標熒光,，而遮蔽掉其它顏色熒光，并且保證熒光之間可以互不干擾,。生成熒光斑點通過 FluoroSpot 讀板儀進行斑點計數(shù)和數(shù)據(jù)分析,。
酶聯(lián)免疫斑點技術 (Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT) 集高靈敏度、高通量,、單細胞水平,、多重功能性檢測等優(yōu)點于一身，被廣泛應用于疫苗免疫原性的效價評估,、細胞治療的效價評估,、基因治療的毒性評估、傳染性疾病/自身免疫性疾病的診斷和療效評估以及腫瘤治療的療效評估,、移植免疫排斥的研究以及基礎免疫學等的研究中,。
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