膜蛋白在細胞的物質運輸,、信號轉導,、增殖分化等許多生命活動中起著非常重要的作用,，是重要的藥物靶點,。然而，由于表達量低,、構象不穩(wěn)定,、難分離純化等原因，許多研究受限于膜蛋白難表達而止步不前,。

山東農業(yè)大學某課題組就遇到這樣一個難題：某膜蛋白用原核體系難以表達,，經過兩年時間反復嘗試，仍未攻克難關,。

珀羅汀生物基于自主研發(fā)的無細胞蛋白表達（CFPS）系統(tǒng),，已成功表達多例全長跨膜蛋白。該課題組慕名而來,，在進一步了解CFPS技術以及珀羅汀生物在無細胞領域的技術優(yōu)勢之后,，決定委托珀羅汀生物，利用CFPS平臺嘗試表達該膜蛋白,。

收到客戶質粒后,，珀羅汀生物研發(fā)人員立即著手構建線性表達模板，為了直接觀測目標膜蛋白的表達情況并提高其可溶性,，研發(fā)人員還構建了融合GFP的表達模板,。隨后,，采用專研的針對膜蛋白的CFPS體系（即PLDK002試劑盒來源體系），并添加去垢劑^【1】,，于收到質粒當天完成無細胞反應體系構建,。

實驗設計：

注：【1】該去垢劑是依據(jù)珀羅汀生物膜蛋白表達案例庫的實驗數(shù)據(jù)選出。

圖1融合GFP的目標膜蛋白在照膠儀下發(fā)出綠色熒光

圖2 目標膜蛋白SDS-PAGE結果圖

經考染,、脫色后,，如圖2所示，未融合GFP的目標膜蛋白（A1,、A2組）同樣在上清液中可溶表達,！此外，分別對比A1,、A2組與B1,、B2組可以發(fā)現(xiàn)，添加去垢劑可促進該膜蛋白的可溶表達,。

珀羅汀CFPS系統(tǒng)不負眾望,，兩天之內，成功表達了困擾該課題組長達兩年的膜蛋白,，“難表達蛋白的救星”名副其實,！本次實驗的成功，再次顯示出珀羅汀CFPS技術在膜蛋白等難度蛋白表達領域中的絕倫,。