雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)操作步驟如下：

1 液體石蠟的準(zhǔn)備 選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟,，將液體石蠟分裝加塞，用牛皮紙包好,，采用以下兩種方式進(jìn)行滅菌：121℃濕熱滅菌30min,，置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分，經(jīng)無菌檢查后備用,。160℃干熱滅菌2個(gè)小時(shí),，冷卻后，經(jīng)無菌檢查后備用,。

2 斜面培養(yǎng)物的制備   參照定期移植法,。

3 灌注石蠟  將無菌的液體石蠟在無菌條件*入培養(yǎng)好的新鮮斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂部1cm左右，使菌體與空氣隔絕,。

4 保藏 4.1　注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫（4～6℃）干燥處保藏,，保藏時(shí)間2～10年。 4.2　保藏期間應(yīng)定期檢查,，如培養(yǎng)基露出液面,，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充無菌的液體石蠟。

5 恢復(fù)培養(yǎng)   恢復(fù)培養(yǎng)時(shí),，挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上,，生長繁殖后，再重新轉(zhuǎn)接一次,。

培養(yǎng)及打管說明：

1,、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端,，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂,，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2,、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩,，使凍干菌體溶解呈懸浮狀,。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,，并在建議的條件下培養(yǎng),。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前,，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長,，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4,、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5,、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏,。