革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中zui常用的一種鑒別染色法,。 

材    料 

    1．葡萄球菌和大腸桿菌混合菌液,。

    2．結(jié)晶紫染色液。

    3．革蘭氏碘液,。

    4．95％酒精,。

    5．番紅染液。

    6．載玻片,。

方   法 

    一,、涂片標(biāo)本的制備（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)一）

    二、革蘭氏染色法 

    1．初染：在上述已固定的涂片上,，滴加結(jié)晶紫染液,，染色1分鐘，水洗,。

    2．媒染：滴加革蘭氏碘液,，作用1—3分鐘，水洗,。

    3．脫色：滴加 95％酒精,，并頻頻搖動(dòng)玻片,，至無(wú)紫色脫出為止（約20秒），水洗,。

    4．復(fù)染：加番紅染液,，復(fù)染半分鐘，水洗,，用吸水紙印干后,，油鏡檢查。

    結(jié)果：視野中可以察見(jiàn)兩種細(xì)菌：

    葡萄球菌：紫色,、球形,、葡萄狀排列。

    大腸桿菌：紅色,、桿狀,、散在排列。

【附】革蘭氏染色法各種染液的配制 

    一,、結(jié)晶紫（Ｃｙｓｔａｌ   ｖｉｏｌｅｔ）染液

    結(jié)晶紫    2.0g

    草酸銨    0.8g

    95％酒精 20ml

    蒸餾水    80ml

    先將結(jié)晶紫溶于酒精,，草酸銨溶于蒸餾水中，然后將兩液混合,，靜置４８小時(shí)使用,。此染液穩(wěn)定，置密閉的棕色瓶中可儲(chǔ)存數(shù)月,。

    二,、革蘭氏碘液

    碘         1.0g

    碘化鉀     2.0g

    蒸餾水     300ml

先將碘與碘化鉀混合，加水少許,，略加搖動(dòng),，待碘*溶解后再加蒸餾水至定量。

三,、脫色劑：95％酒精

四,、復(fù)染劑：番紅（沙黃Ｓａｆｒａnｉｎｅ Ｏ）染液

沙黃（Ｓａｆｒａnｉｎｅ Ｏ） ０．２５ｇ

９５％乙醇 １０ｍｌ

蒸餾水 適量

將沙黃溶解于９５％乙醇中，待*溶解再加蒸餾水至１００ｍｌ