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首款TCR-T細(xì)胞療法上市,！跟隨細(xì)胞治療之父，領(lǐng)略活細(xì)胞成像風(fēng)采
今年8月,，Adaptimmune宣布其TCR-T細(xì)胞療法Afami-cel已經(jīng)獲得美國FDA批準(zhǔn)上市,，這是全球首款獲批上市用于治療實(shí)體瘤的TCR-T細(xì)胞療法。首款TCR-T細(xì)胞療法獲批上市令行業(yè)振奮,，自2017年FDA批準(zhǔn)Kymriah以來,，不斷有新的細(xì)胞治療產(chǎn)品獲批。細(xì)胞治療領(lǐng)域的范圍不斷擴(kuò)大,，新的免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的新技術(shù)正在研究中,，全球研發(fā)項(xiàng)目也在不斷增加。
就讓我們跟隨著“細(xì)胞治療之父”Carl June教授的研究進(jìn)展,，看看Incucyte®實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像如何在該領(lǐng)域大展身手,。
2013年發(fā)表在《Science Translational Medicine》的論文，詳細(xì)分析了針對(duì)MAGE A3抗原的T細(xì)胞受體（TCR）在癌癥治療中的開發(fā),、測試及其影響,。研究人員開發(fā)了一種特異性針對(duì)HLA-A*01限制的MAGE A3抗原的高親和力T細(xì)胞受體，用于過繼性療法以靶向表達(dá)MAGE A3抗原的癌細(xì)胞,。使用Incucyte®測試了腫瘤細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)以及針對(duì)心肌細(xì)胞殺傷體外實(shí)驗(yàn)的安全性評(píng)估,。
不同突變的 MAGE A3 TCR-T（a3a，a3b,b2a,b2b等）細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn): 通過 Incucyte®平臺(tái)檢測凋亡細(xì)胞數(shù),。以HLA - A * 01 + （括號(hào)中顯示為 +/++/+++ HLA-A*01 狀態(tài)）不同腫瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞,，將其與轉(zhuǎn)導(dǎo)的TCR-T細(xì)胞共培養(yǎng)，并檢測細(xì)胞凋亡情況,，以此評(píng)估T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果,。
iCell殺傷實(shí)驗(yàn)：將iCell心肌細(xì)胞與a3a和野生型轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞共培養(yǎng)，使用Incucyte®的相差圖像觀察iCell在24小時(shí)后的存活情況,，以評(píng)估a3a 轉(zhuǎn)導(dǎo)的T對(duì)iCell的殺傷作用,。iCells 會(huì)被 a3a轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞殺死，但不會(huì)被野生型轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞殺死,。提示表達(dá)高親和力MAGE A3 TCR的T細(xì)胞注入患者體內(nèi)可能會(huì)對(duì)心臟組織產(chǎn)生致命毒性,。
因?yàn)镮ncucyte®軟件計(jì)算的準(zhǔn)確性和成像清晰度，C.June是最早使用Incucyte®的客戶之一
2020年Carl June團(tuán)隊(duì)在《Nature Biotechnology》上發(fā)表的關(guān)于通過基因工程改造人類巨噬細(xì)胞使其表達(dá)嵌合抗體受體（CAR）來治療癌癥的研究,?？紤]到巨噬細(xì)胞獨(dú)特的效應(yīng)功能和他們穿透腫瘤的能力，研究者用CAR基因改造了人巨噬細(xì)胞以引導(dǎo)它們針對(duì)腫瘤的吞噬活性,。CAR-Ms（CAR巨噬細(xì)胞）在體外展現(xiàn)出了抗原特異性的吞噬作用以及腫瘤清除,。在兩個(gè)實(shí)體瘤異種移植小鼠模型中，單次輸注CAR-Ms降低了腫瘤負(fù)擔(dān)并且延長了整體生存,。Incucyte®用來評(píng)估CAR-M對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬和殺傷作用
CAR-M對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬和殺傷作用
Incucyte®結(jié)果：h圖,，pH依賴性染料和Her2標(biāo)記的微球被UTD（未轉(zhuǎn)導(dǎo)）或CAR-M吞噬的情況，說明CAR19ζ巨噬細(xì)胞以一種抗原特異性的方式吞噬攜帶抗原的腫瘤細(xì)胞,。K圖,殺傷動(dòng)力學(xué)試驗(yàn),，使用Incucyte®評(píng)估在10:1的E:T比率下，UTD或CAR-M對(duì)SKOV3細(xì)胞的殺傷動(dòng)力學(xué),。CAR-M以一種劑量和時(shí)間依賴性的方式根除了SKOV3,。
無論終點(diǎn)法還是實(shí)時(shí)的細(xì)胞效應(yīng)，Incucyte®都在行,！
2022 年Carl June團(tuán)隊(duì)在《Nature》上發(fā)表論文介紹使用合成的IL-9受體來增強(qiáng)用于治療實(shí)體腫瘤的過繼細(xì)胞療法,。將正交IL-2受體胞外域（ECD）與共同γ鏈（γc）細(xì)胞因子IL-4,、IL-7、IL-9和IL-21受體的胞內(nèi)域（ICD）融合,，作為嵌合抗原受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)序列IL-2Rβ-ECD-IL-9R-ICD（o9R）其轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞在小鼠黑色素瘤和胰腺癌模型中表現(xiàn)出優(yōu)越的抗腫瘤效力,。本文中使用Incucyte®進(jìn)行實(shí)時(shí)細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)和TCR-T細(xì)胞連續(xù)殺傷實(shí)驗(yàn)。
Incucyte®數(shù)據(jù)：人黑色素瘤細(xì)胞（nRFP-M407）在加入未轉(zhuǎn)導(dǎo)或共轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞（ho2R–NYESO1-TCR或ho9R–NYESO1-TCR）后的殺傷效力,。每72小時(shí)加入新的黑色素瘤細(xì)胞,，并使用Incucyte®系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測。ho9R–NYESO1-TCR可以對(duì)腫瘤細(xì)胞連續(xù)殺傷,，而不衰竭,。
連續(xù)殺傷往往要做很長時(shí)間，比如兩個(gè)星期,，活細(xì)胞成像的無干擾拍攝優(yōu)勢(shì)就體現(xiàn)出來了,！
今年4月份Carl June團(tuán)隊(duì)在《Nature Communications》發(fā)表的關(guān)于自然殺傷（NK）細(xì)胞在冷凍保存后功能受損的機(jī)制以及通過細(xì)胞因子預(yù)處理來改善其恢復(fù)和功能的方法,。研究發(fā)現(xiàn)冷凍保存后的NK細(xì)胞在解凍后通過細(xì)胞凋亡死亡，主要由于細(xì)胞毒性顆粒中的顆粒酶B泄漏,。作者提出在冷凍保存前對(duì)NK細(xì)胞進(jìn)行白細(xì)胞介素-15（IL-15）和白細(xì)胞介素-18（IL-18）的聯(lián)合預(yù)處理可以恢復(fù)NK細(xì)胞的功能,。Incucyte®來測試實(shí)時(shí)的細(xì)胞毒性和凋亡實(shí)驗(yàn)。
Incucyte®結(jié)果：e圖,，使用K562細(xì)胞作為靶細(xì)胞,，檢測NK細(xì)胞在冷凍保存前后的細(xì)胞毒性。結(jié)果表明,，冷凍保存后的NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性顯著低于非冷凍保存的NK細(xì)胞,。b圖，Incucyte®Caspase-3/7染料來指示早期凋亡,。結(jié)果發(fā)現(xiàn),，從解凍后4小時(shí)開始，冷凍保存的NK細(xì)胞中caspase-3/7激活水平高于非冷凍保存的NK細(xì)胞,，并在9小時(shí)后迅速上升至平臺(tái)期,。c圖使用Incucyte® Cytox NIR染料來指示細(xì)胞死亡，實(shí)驗(yàn)從解凍后12小時(shí)開始檢測到細(xì)胞死亡,，并且在剩余的時(shí)間內(nèi)細(xì)胞死亡數(shù)量逐漸增加,。表明冷凍保存的NK細(xì)胞在解凍后會(huì)經(jīng)歷程序性細(xì)胞死亡，而不是由于急性物理損傷導(dǎo)致的壞死,。
Incucyte®結(jié)果：使用IL-15+IL-18預(yù)處理的NK細(xì)胞在冷凍保存前后的細(xì)胞殺傷結(jié)果表明經(jīng)過IL-15+IL-18預(yù)處理的NK細(xì)胞,，其細(xì)胞毒性在冷凍前后保持相似。說明IL-15+IL-18預(yù)處理對(duì)NK細(xì)胞的保護(hù)作用,，促進(jìn)NK細(xì)胞的恢復(fù)功能,。
Incucyte®證實(shí)了冷凍保存的NK細(xì)胞死亡是在解凍后的一段時(shí)間內(nèi)逐漸發(fā)生的,，而不是立即發(fā)生的壞死，明確了凋亡發(fā)生的時(shí)間進(jìn)程,?；罴?xì)胞實(shí)時(shí)成像，不讓您錯(cuò)過每個(gè)細(xì)節(jié),。
為什么細(xì)胞治療研究要用Incucyte®實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)呢？
培養(yǎng)箱內(nèi)可長達(dá)數(shù)周的連續(xù)觀察,，最短幾分鐘間隔拍攝,，減少人力，防止過多操作對(duì)細(xì)胞的傷害
6個(gè)板位,，分別獨(dú)立設(shè)置檢測程序,，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析,，輸出圖片,、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)
大于100種優(yōu)化過的活細(xì)胞專用熒光試劑,、耗材及詳盡的Protocol,，文章數(shù)大于16,000篇
只要放好您的細(xì)胞，其他交給Incucyte® 吧,！
下載文集贏好禮
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