概述

　　B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,，能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,，不可能持續(xù)分化增殖下去,，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的,。將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞,，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤細(xì)胞的無限分裂的能力,，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力,。將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠腹水內(nèi)即可獲得大量的、單一的特異性抗體,。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù),。

過程

　　1）免疫脾細(xì)胞的制備 制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì),。免疫方法同一般血清的制備,，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。

　　2）骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選 在融合前,，骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選,，防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，融合前24h換液一次,，使骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期。

　　3）細(xì)胞融合的關(guān)鍵:

　　1技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗,。例如,，供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的,。

　　2融合試驗(yàn)zui大的失敗原因是污染,，融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術(shù),。

　　4）陽性克隆的篩選 應(yīng)盡早進(jìn)行,。通常在融合后10天作*次檢測，過早容易出現(xiàn)假陽性,。檢測方法應(yīng)靈敏,、準(zhǔn)確,、而且簡便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì),，以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有 RIA法,、 ELISA法和免疫熒光法等,。其中ELISA法zui簡便，RIA法zui準(zhǔn)確,。陽性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次,，均陽性時(shí)才確定為陽性克隆進(jìn)行擴(kuò)增。

　　5）克隆化 克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體,?？寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選。這是因?yàn)槌跗诘碾s交瘤細(xì)胞是不穩(wěn)定的,，有丟失染色體的傾向,。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株。

　　動(dòng)物免疫

　　細(xì)胞融合

　　克隆篩選

　　交雜瘤細(xì)胞的克隆化

　　腹水制備與單抗純化

　　關(guān)于抗體制備的詳細(xì)內(nèi)容參見“中國免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)網(wǎng)”,。