無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作方法

來(lái)源：和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司 2024年08月21日 13:53

　　無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作方法主要包括細(xì)胞的收集,、離心,、凍存液的加入,、分裝,、凍存以及后續(xù)的解凍與復(fù)蘇等步驟,。以下是詳細(xì)的操作方法：

　　一,、細(xì)胞的收集與離心

　　細(xì)胞收集：

　　使用常規(guī)方法收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞。對(duì)于貼壁細(xì)胞,，可以使用胰酶或EDTA等試劑進(jìn)行消化,，使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落，然后收集到試管或離心管中,。

　　細(xì)胞離心：

　　將收集到的細(xì)胞懸浮液置于離心管中,，進(jìn)行離心處理以收集細(xì)胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000 rpm,，4℃,，持續(xù)35分鐘。注意，離心時(shí)應(yīng)確保溫度適宜,，以免對(duì)細(xì)胞造成損傷,。

　　離心結(jié)束后，小心移去離心管中的上清液,，保留細(xì)胞沉淀,。

　　二、凍存液的加入與混合

　　加入凍存液：

　　向含有細(xì)胞沉淀的離心管中加入適量的無(wú)血清細(xì)胞凍存液,。凍存液的加入量應(yīng)根據(jù)細(xì)胞沉淀的體積和所需的細(xì)胞濃度來(lái)確定,，通常使細(xì)胞濃度達(dá)到5×10^5至5×10^6 cells/ml或更高(如1×10^7/ml)。

　　輕柔地混合均勻,，避免產(chǎn)生過(guò)多的氣泡和剪切力,，以免對(duì)細(xì)胞造成損傷。

　　三,、分裝與凍存

　　分裝：

　　將混合均勻的細(xì)胞懸液分裝到已標(biāo)示

冷凍保存管中,。建議每管分裝1ml或1.5ml的細(xì)胞懸液，以便于后續(xù)的使用和管理,。

　　凍存：

　　將分裝好的細(xì)胞凍存管直接放入-80℃超低溫冰箱中進(jìn)行冷凍保存,。如果需要長(zhǎng)期保存或運(yùn)輸?shù)揭旱拗校梢韵仍?80℃冰箱中過(guò)夜或至少放置一天時(shí)間,，然后再轉(zhuǎn)移到-196℃的液氮罐中,。

　　四、解凍與復(fù)蘇

　　解凍：

　　從冰箱或液氮罐中取出凍存的細(xì)胞管,，立即放入37℃水浴槽中快速解凍,。注意，解凍過(guò)程中應(yīng)不斷搖動(dòng)凍存管,，以確保細(xì)胞懸液均勻受熱并盡快融化,。

　　復(fù)蘇：

　　待細(xì)胞懸液融化后，立即加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)基與細(xì)胞混合,。然后,，將混合液轉(zhuǎn)移到新的離心管中，進(jìn)行離心處理以收集細(xì)胞沉淀(離心條件同上),。

　　離心結(jié)束后,，移去上清液，加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后,，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中，置于37℃,、5% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng),。

　　注意事項(xiàng)

　　無(wú)菌操作：在整個(gè)操作過(guò)程中,，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，以防止細(xì)胞污染,。

　　細(xì)胞狀態(tài)：選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存,，有助于提高復(fù)蘇后細(xì)胞的存活率和生長(zhǎng)能力,。

　　凍存液成分：無(wú)血清細(xì)胞凍存液的成分和pH值對(duì)細(xì)胞凍存效果有重要影響,。在選擇和配制凍存液時(shí)，應(yīng)注意成分的搭配和pH值的合理性,。

　　凍存與解凍條件：凍存和解凍過(guò)程中的溫度和時(shí)間控制對(duì)細(xì)胞存活率至關(guān)重要,。應(yīng)遵循推薦的凍存和解凍條件進(jìn)行操作。

　　細(xì)胞密度：在凍存前和復(fù)蘇后,，應(yīng)注意檢查細(xì)胞的密度和生長(zhǎng)狀態(tài),，以便及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)條件。

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