誘導(dǎo)多能干細胞（iPSC）的研究和應(yīng)用正日益成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要方向,。然而,，iPSC的培養(yǎng)過程中存在諸多不確定性，因此,，進行規(guī)律性的質(zhì)量控制（ QC）對于確保實驗的可靠性,、降低成本和提高效率至關(guān)重要。國際干細胞研究學(xué)會（ISSCR）提供了一系列指導(dǎo)原則和建議,，本文將圍繞iPSC QC 的三個關(guān)鍵點：基本因素,、功能性驗證和基因組穩(wěn)定性,，探討何時進行QC檢測以及如何實施。

一,、iPSC QC的關(guān)鍵點

iPSC QC（誘導(dǎo)多能干細胞質(zhì)量控制）的關(guān)鍵點主要包括以下三個方面：

1. 基本因素：這些因素是評估iPSC質(zhì)量的基礎(chǔ),，包括：

   - 細胞是否污染：檢查細胞培養(yǎng)物中是否存在細菌、真菌,、支原體等外來污染,。

   - STR類型：通過短串聯(lián)重復(fù)序列分析來確認細胞株的遺傳身份，確保其來源的準(zhǔn)確性,。

   - 生長速度：監(jiān)測細胞的增殖速率,，以評估其生長活力。

   - 細胞形態(tài)：觀察細胞的大小,、形狀和排列,，以判斷其正常性。

2. 功能性驗證：這些測試確保iPSC具有正常的生物學(xué)功能,，包括：

   - 基因表達分析：通過RT-PCR,、基因芯片等技術(shù)，檢測iPSC中特定基因的表達水平,。

   - 分化潛能：評估iPSC分化為三種胚層細胞的能力,，以及是否能形成功能性細胞類型。

3. 基因組穩(wěn)定性：這些分析確保iPSC的遺傳穩(wěn)定性,，包括：

   - 拷貝數(shù)變異（CNV）分析：檢測細胞基因組中的拷貝數(shù)變化,，這些變化可能導(dǎo)致基因功能的改變。

   - 單核苷酸變異（SNV）分析：識別基因組中的單點突變,，這些突變可能影響細胞的功能。

   - 基因編輯正確性及脫靶效應(yīng)評估：對于經(jīng)過基因編輯的iPSC,，檢查編輯是否準(zhǔn)確以及是否存在非特異性的脫靶效應(yīng),。

二、iPSC QC檢測的時機

l 重要項目開始前：在項目啟動前進行QC檢測,，可以確保使用的iPSC質(zhì)量合格,，避免后續(xù)實驗的無效投入。

l iPSC編輯或凍存后：編輯或凍存過程可能影響iPSC的質(zhì)量,，因此在這些操作后進行QC檢測十分必要,。

l 細胞培養(yǎng)異常時：當(dāng)細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)表型改變或?qū)嶒炛貜?fù)性差時，應(yīng)及時進行QC檢測,，以發(fā)現(xiàn)問題所在,。

三、IPCS基因組突變的QC策略

• 突變風(fēng)險：研究顯示,，iPSC細胞株有20%-30%的概率發(fā)生基因突變,，這些突變可能隨著傳代次數(shù)的增加而加劇,，對實驗結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重影響。

• 篩選時機：為了及時發(fā)現(xiàn)突變并降低成本,，建議在iPSC還未進行重編程和基因改造的野生型（WT）時期進行篩選,。

• 高效鋪板方法：在需要大量樣本的情況下，手動鋪板不現(xiàn)實,。采用安達望的VIPS高效率細胞鋪板系統(tǒng)結(jié)合CMX系統(tǒng)細胞檢測系統(tǒng)進行單克隆篩選和生長追蹤,，可以提高效率。

•  克隆恢復(fù)率：通過培養(yǎng)基的優(yōu)化,，可以使克隆恢復(fù)率達到最高70%,，確保篩選過程的效率。

• l基因分析：選取單克隆來源且形態(tài)符合要求的克隆團進行基因分析,，排除突變細胞株,，從源頭避免突變帶來的風(fēng)險。

      iPSC的培養(yǎng)和應(yīng)用潛力巨大,，但隨之而來的質(zhì)量控制問題也不容忽視,。通過遵循ISSCR的指導(dǎo)原則，我們可以在適當(dāng)?shù)臅r機進行有效的QC檢測,，確保iPSC的質(zhì)量和穩(wěn)定性,。特別是在基因組突變方面，通過早期篩選和高效的單克隆篩選技術(shù),，我們可以減少突變風(fēng)險,，提高實驗的可靠性和效率。隨著iPSC技術(shù)的不斷進步,，未來還將出現(xiàn)更多高效,、精確的QC方法，為iPSC的研究和應(yīng)用提供更強有力的支持,。

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