人多能干細胞（hPSC）具有自我更新和分化為各種細胞類型的潛能，為醫(yī)學,、藥物研發(fā)和生命科學研究提供了不少貢獻,。近年來,，隨著生物技術的發(fā)展,，hPSC的培養(yǎng)技術不斷優(yōu)化,，其中多層細胞工廠作為一種高效的2D培養(yǎng)方法,，逐漸受到研究者的關注,。本文將為您揭秘如何通過多層細胞工廠進行hPSC的2D培養(yǎng),。

一、多層細胞工廠的優(yōu)勢

1. 高密度培養(yǎng)：多層細胞工廠采用層疊式設計，可充分利用空間,，實現(xiàn)細胞的高密度培養(yǎng),，提高產(chǎn)量。

2. 易于操作：細胞工廠的操作簡便,，便于規(guī)?；a(chǎn)。

3. 條件均一：細胞工廠內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,，有利于細胞生長和分化,。

4. 產(chǎn)量可控：通過調整細胞工廠的層數(shù)，可輕松實現(xiàn)產(chǎn)量的調控,。

二,、如何通過多層細胞工廠進行hPSC的2D培養(yǎng)

1. 細胞接種

將hPSC接種到預先處理過的細胞工廠中，確保細胞均勻分布,。接種密度可根據(jù)實驗需求進行調整,。

2. 日常培養(yǎng)

接種后第1、3和4/5天進行補料,，監(jiān)測配套燒瓶以確定最佳收獲日期（≥ 90%匯合度）,。具體操作如下：

（1）將廢培養(yǎng)基倒入廢液瓶中，更換新鮮培養(yǎng)基,。

（2）更換培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱,。

3. 收獲細胞

當配套燒瓶匯合度達到90 - 95％時（接種后第5 - 6天）收獲細胞工廠的hPSC。具體步驟如下：

（1）將用過的培養(yǎng)基倒入廢液瓶中,。

（2）用200 mL PBS沖洗細胞工廠,。

（3）添加200 mL TrypLE™ Express或0.25%胰蛋白酶-EDTA。

（4）37°C孵育8 - 10分鐘,。

（5）將200 mL ACF酶抑制溶液或TeSR™-AOF添加到燒瓶中，混勻后倒入無菌1 L瓶中,。

（6）用400 mL無菌PBS沖洗細胞工廠,，倒入同一無菌收集瓶中。

（7）將細胞懸浮液分裝到離心管中,，離心后去除殘留的解離試劑,，重新懸浮并匯集細胞。

三,、實驗結果

1. 未分化狀態(tài)的標志物表達

從細胞工廠收獲的hPSC表達了未分化狀態(tài)的標志物,，如OCT-4和TRA-1-60，超過90%的細胞均表達這兩種標記物,。

2. 冷凍后仍保持高活力并有效附著

從細胞工廠收獲的單細胞hPSC在-135°C的FreSR™-S中冷凍后,，仍保持高活力并有效附著。

3. 三譜系分化

從細胞工廠收獲的hPSC具有三譜系分化能力，可分化為定形內(nèi)胚層,、早期中胚層和神經(jīng)祖細胞,。

4. 保持正常核型

從細胞工廠收獲的hPSC保持正常核型，擴大培養(yǎng)規(guī)模后,，細胞未檢測到額外的拷貝數(shù)變異,。

通過本文的介紹，相信您已對如何通過多層細胞工廠進行hPSC的2D培養(yǎng)有了深入了解,。多層細胞工廠作為一種高效的2D培養(yǎng)方法,，為hPSC的研究和應用提供了有力支持。在今后的研究中,，多層細胞工廠將繼續(xù)發(fā)揮其優(yōu)勢,，助力hPSC領域的發(fā)展。

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