裝備應考慮的主要問題及功能配置
通用實驗室醫(yī)用離心機可能會深入到每一個技術相關實驗室,是一個潛在發(fā)展的市場,,應當引起裝備管理方面的高度重視,。在明確實驗室的主次技術需求及相應離心方法的前提下,zui大rcf,、rpm,、樣品量是選擇離心技術的基本參數(shù),要在此基礎上考慮離心機的選型,、主要功能及兼顧功能的配置,。
3.1醫(yī)用實驗室常規(guī)離心技術功能需求
3.1.1RNA離心制備
培養(yǎng)細胞在低速離心(水平轉頭,300xg)完成細胞分離,、裂解后,,加RNA沉淀提取液,于4℃,,10000~12O00xg(角轉頭,,微量1.5/2.0mlEppendorf管,或≥15ml,、50ml管)分步提?。唤M織樣本需先經勻漿預處理,。
3.1.2DNA離心制備
水平轉頭,,2000xg左右,1.5/2.0mlEppendof管,,15ml,、50mlFalcon管或更大體積;再經12000~27000xg,。制備質粒DNA:角轉頭,,250ml或500m1/瓶,5000-6000xg,;15-50rnl/管,,12000~27000xg;4℃或特定溫度,。
3.1.3載體表達蛋白分離
角轉頭,,250~500ml/瓶,4000xg,;15~50mlFalcon管,,3O00xg;角轉頭,50ml管/瓶,,27000xg,;4℃。
3.1.4細胞純化和亞細胞器分離
用差速離心法分離細胞器和大小差別懸殊的細胞,。由低速分步到高速離心,,細胞器的沉降順序是細胞核、線粒體,、溶酶體,、過氧化酶體、內質網,、高爾基體,、核蛋白體,所有過程控溫4℃,。
收集細胞:水平轉頭,,850~1850xg,優(yōu)選錐形底管,;分離細胞核和細胞質,,3300xg;核提取,,25O00xg,。進一步純化分離將聯(lián)用超速離心,。
密度梯度速率沉降法分離密度相近而大小不等的細胞或__細胞器,。采用合適的密度梯度介質,水平轉頭,,1OOxg左右,。等密度梯度法分離細胞器,10000-30O00xg,。
3.1.5細胞學涂片離心通過在個別機型上配置細胞學涂片離心轉頭,,實現(xiàn)一次4片離12,;據(jù)細胞學特性,,rc啦制在5O~1000xg,。選購時需注意離心容器的zui小樣品處理量。
3.1.6離心超濾,、濃縮,、抽提
配合市售離心過濾濃縮管(1.5~80ml,Coming,,Millipore,,Spectrum等)或樣品抽提容器使用,采用角轉頭或水平轉頭,角轉頭可使超濾膜與離心力不成直角而避免濃度極化,;1000~l2O00xg不等,,可參考所購容器的使用說明。
3.1_7微孔板離心
酶標板,、TC板,、PCR板以及樣品抽提純化板的離心,在通用離心機可通過在大容量水平轉頭上配置微孔板吊架(rcf_-般將低于轉頭的額定值)或選用專門離心轉頭實現(xiàn),,≥1O00xg,。每個吊架可放1~4塊標準96孔板或更多。
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