高速逆流色譜(high-speed countercurrent chromatography,簡稱HSCCC) 是基于樣品在旋轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)的互不混溶的兩相溶劑間分配不同而獲得分離,,因而無須固體載體或支撐體,,能達(dá)到在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)分離和制備,并且可以達(dá)到幾千個(gè)理論塔板數(shù),。
1.高速逆流色譜儀原理及特點(diǎn)
HSCCC利用了一種特殊的流體動(dòng)力學(xué)(單向流體動(dòng)力學(xué)平衡)現(xiàn)象,。具體表現(xiàn)為一根100多米長的螺旋空管,注入互不相溶的兩相溶劑中的一相作為固定相,,然后作行星運(yùn)動(dòng),;同時(shí)不斷注入另一相(流動(dòng)相),由于行星運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的離心力場(chǎng)使得固定相保留在螺旋管內(nèi),,流動(dòng)相則不斷穿透固定相,;這樣兩相溶劑在螺旋管中實(shí)現(xiàn)的接觸、混合,、分配和傳遞,。由于樣品中各組分在兩相中的分配比不同,因而能使樣品中各組分得到分離,。
2.HSCCC的優(yōu)點(diǎn)
2.1 應(yīng)用范圍廣,,適應(yīng)性好。由于溶劑系統(tǒng)的組成與配比可以是無限多的,,因而從理論上講HSCCC適用于任何極性范圍的樣品的分離,,所以在分離天然化合物方面具有其獨(dú)到之處。并因不需固體載體,,而消除了氣液色譜中由于使用載體而帶來的吸附現(xiàn)象,,特別適用于分離極性物質(zhì)和其它具有生物活性的物質(zhì)。
2.2 操作簡便,,容易掌握,。分離過程中對(duì)樣品的前處理要求低,僅需一般的粗提物即可進(jìn)行HSCCC的制備分離或分析,。
2.3 回收率高,。由于沒有固體載體,不存在吸附,、降解和污染,,理論上樣品的回收率可達(dá)100%。在實(shí)驗(yàn)中只要調(diào)整好分離條件,,一般都有很高的回收率,。
2.4 重現(xiàn)性好。如果樣品不具有較強(qiáng)的表面活性作用,,酸堿性也不強(qiáng),,那么多次進(jìn)樣,,其分離過程穩(wěn)定性都保持很好、峰的保留相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也小于2%,,重現(xiàn)性相當(dāng)好,。
2.5 分離效率高,分離量較大,。由于其與一般色譜的分離方式不同,,能實(shí)現(xiàn)梯度操作和反相操作、亦能進(jìn)行重復(fù)進(jìn)樣,,使其特別適用于制備性分離,,產(chǎn)品純度高。研究結(jié)果表明:一臺(tái)普通的高速逆流色譜儀一次進(jìn)樣可達(dá)幾十毫升,,一次可分離近10g的樣品,。因此,在80年代后期被廣泛地應(yīng)用于植物化學(xué)成分的分離制備研究,。
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