NMR的定量分析方法

與其他光譜方法相同,，NMR定量分析是通過比較不同的吸收峰強度實現(xiàn)的。在進行NMR定量分析時，對于確定的核（如質(zhì)子）,，其信號強度與產(chǎn)生該信號的核（如質(zhì)子）的數(shù)目成正比，而與核的化學性質(zhì)無關(guān),，故一般只要對該化合物中某一基團上質(zhì)子引起的峰面積進行比較,，即可求出其含量。當分析混合物時,，利用內(nèi)標法或相對比較法分析混合物中某一化合物時,，無需該化合物的純品作為對照標品。內(nèi)標法只要找一合適的內(nèi)標物進行比較就可求出其含量,；而采用各個組分的各自基團上質(zhì)子產(chǎn)生的吸收峰強度進行相對比較,，便可求得其相對含量。因此,，在測量峰面積或峰高以前,，必需了解化合物的各組成基團上質(zhì)子所產(chǎn)生共振峰的相對位置,，也就是它們的化學位移值，并選擇一個合適的峰作為測量峰,。

USP（24）采用的NMR定量分析方法主要有兩種：

1,、內(nèi)標法（測量法）：

此法為NMR分析zui常用的方法，它與GC內(nèi)標法相似,，在樣品溶液中,，直接加入一定量的內(nèi)標物后，進行NMR光譜測定,。將樣品基團上的質(zhì)子引起的共振峰面積進行比較,，當樣品與內(nèi)標均經(jīng)精密稱重時，則樣品的重量（）可由下式求得：

=Ws×（Ax/As）×（E/Es）

式中,，Ws為內(nèi)標物重量,；Ax為樣品峰面積；As為內(nèi)標物峰面積,；E為樣品在該化學位移處的質(zhì)子當量,，即E=樣品分子量/產(chǎn)生該共振峰的基團中的質(zhì)子數(shù)；Es為內(nèi)標物在該化學位移處的質(zhì)子當量,，即Es=內(nèi)標物分子量/產(chǎn)生該共振峰的基團中的質(zhì)子數(shù),。若樣品稱重為W，則百分含量=/W×100%

對內(nèi)標物的要求：一個較好的內(nèi)標物至少應具備以下性質(zhì)：①不應與樣品中任何組分相互作用,。②能產(chǎn)生單一的共振峰,。在掃描的磁場區(qū)域中，參比共振峰與樣品峰的位置至少有30Hz間隔,。③應能溶于分析溶劑中,。④應有盡可能小的質(zhì)子當量（Es）。NMR定量分析常用的內(nèi)標物有：六甲基三硅氧烷（0.15ppm）,；三噁烷（5.10ppm）,；吡嗪（8.51ppm）；苯或苯甲酸芐酯（5.3ppm處,，芐基質(zhì)子的吸收峰）,，適用于非芳香化合物；馬來酸適用于非鏈烯氫化合物,。

2,、相對測量法：

當不能獲得樣品的純品或合適的內(nèi)標物時，可用相對測量法進行分析,。計算含量是以基團上的一個質(zhì)子引起的吸收峰面積（A1/n1）和雜質(zhì)基團上一個質(zhì)子引起的吸收峰面積（A2/n2）進行比較,，然后按下式計算樣品與該雜質(zhì)的相對百分含量：

樣品的相對百分含量= ｛（A1/n1）/〔（A1/n1）+（A2/n2）〕｝×100%

式中，n1，n2是基團的質(zhì)子數(shù),。

NMR定量分析方法簡單,、快速、專屬性高和不破壞被測樣品,，可選擇性地測定混合藥物或藥物制劑中的組分乃至藥物的立體異構(gòu)體,。只要樣品中每個組分有一個或一組特征的、且不重疊的吸收峰存在時,，一般都有可能應用NMR方法進行定量分析,。

D Offset（基線位置的突然改變
1電源電壓波動 使用穩(wěn)壓器
2 電路接口處連接不好 檢查，清洗其接口處,，擰緊接口
3進樣口被污染
4色譜柱被污染
5毛細管末端插入檢測器太深
6 檢測器被污染
E毛刺
1 電磁干擾 關(guān)閉電磁干擾源
2顆粒污染進入檢測器
3氣路密封松動,，氣體泄露 擰緊松動的密封
4檢測器內(nèi)部電路接口或輸入，輸出信號接口松動 檢查,，清洗,，擰緊接口，更換之
積塵或被腐蝕
F Wander（低頻率的噪音）
1溫度,，壓力等環(huán)境條件的波動 找到環(huán)境因素變化與基線的關(guān)系,，然后穩(wěn)定之
2溫度控制漂移 測量檢測器的溫度
3 載氣中含雜質(zhì)（溫度穩(wěn)定時） 更換載氣或氣體凈化器
4進樣口被污染
5毛細管被污染
6氣體流速控制失靈 清洗或更換氣體