磁珠法提取核酸的3種樣本處理方法

轉(zhuǎn)自：洛陽吉恩特生物科技有限公司 磁珠法核酸提取實驗室

以生物磁珠為載體提取核酸,，所有反應(yīng)是在液體體系中進行的，但生物樣本多種多樣,，有液體也有固體,，或者固液混合體，大多數(shù)生物樣本在進行核酸提取純化之前需要進行一定的前處理,，液化,、富集、除雜等都是常見的前處理方式,。

一,、液化

將固體樣本轉(zhuǎn)化為液體樣本是最重要的樣本前處理方法，固體樣本是很難直接在試劑盒的作用下用于提取核酸的,。固體樣本跟雜質(zhì)一樣,，會嚴(yán)重阻礙磁珠吸附核酸，并且耗損大量的磁珠位點,，很難取得良好的提取效果,。

常見的固體樣本如植物組織、動物組織,、泥土,、濃痰等。

植物組織和動物組織,，可剪取適量的樣本,，在研缽內(nèi)快速研磨,。研磨時如果需要保護RNA，可以采用液氮研磨的方式,。如果不需要提取RNA,，也可以加入裂解液或者生理鹽水幫助研磨成勻漿狀態(tài)。

泥土的處理方式主要是通過浸泡,。因為從泥土中提取核酸,，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸,。使用生理鹽水或者其他適當(dāng)緩沖液體浸泡泥土,，如果是較為干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小顆粒,，浸泡過程中可用小棒攪動幫助泥土分散,。浸泡一段時間后，將泥漿用三層濾紙過濾,，過濾所得的液體,，即可用于磁珠法提取。

如濃痰,、膿液等固液混合又較為黏膩的生物樣本,，可以先使用氫氧化鈉液體進行堿解液化，再酸中和后,，作為液體樣本進行磁珠法提取,。

以上方法處理固體樣本，所得的液體,，可能并不清澈透明,，雜質(zhì)還是相對較多的，如果必要,，使用離心的方式，可以除去更多的雜質(zhì),，但相對應(yīng)該控制離心速度在10000r/min以下,，否則核酸也會一起隨雜質(zhì)被離心下去。

二,、富集

很多時候,，用磁珠法提取的核酸都是微量或者痕量的樣本，直接使用樣本進行操作,，所能得到的核酸很少,，這就要求下游的檢測試劑靈敏度很高，如果檢測試劑靈敏度不足,，在樣本痕量的情況下,，很可能檢測不出，出現(xiàn)假陰性。所以對于微量樣本和痕量樣本,，可以進行富集前處理,。

有些時候，樣本屬于常量樣本,，但下游實驗需求核酸量大,，也需要對樣本進行富集，以便每個提取都能獲得更多的核酸,。

或者樣本量巨大,，無法直接使用試劑盒進行提取，也需要進行富集操作,。

常見的富集方法包括蒸發(fā)和離心,。

以土壤浸潤水樣本為例，浸泡大量的土壤樣本,，獲得了500ml浸潤水,，顯然無法將500ml浸潤水作為樣本直接提取?？梢韵葘颖痉盅b在兩個30ml離心管內(nèi)進行,，12000r/min離心十分鐘，棄去上清液后,，用適量生理鹽水重懸沉淀后,，移入小離心管內(nèi)，在80℃溫度下蒸發(fā)液體至液體量少于300ul,，即可用于磁珠法進行核酸提取,。

三、除雜

很多生物樣本中都含有大量的雜質(zhì),，這些雜質(zhì)有的可以在試劑盒核酸提取的過程中被洗滌液除去,，但有些，很難通過后續(xù)的試劑盒洗滌直接除去,，這就要求我們在樣本前處理的時候,，就直接先做初步的除雜。

以大量血液樣本為例,，常規(guī)定量血液樣本（200ul以下）,，通常是不需要提前除雜的。但如果血液樣本的量很大,，如4-5ml/提取,，就很難直接進行了，不僅樣本的量超過常規(guī)試劑盒的容納范圍,，雜質(zhì)也非常多,。

通常的做法是,，提前加入紅細胞裂解液，離心,，棄去上層液體,，裂解液重懸樣本。

各種各樣的樣本前處理方法是很靈活多樣的,，根據(jù)下游需求不同,，樣本特性不同，通常是多種前處理方式組合應(yīng)用,，以達到效果,。

四、結(jié)語

    總之,，在磁珠法核酸提取的過程中,，樣本的前處理工作對整個提取結(jié)果會有至關(guān)重要的影響。當(dāng)然,，選取合適的磁珠,，更能使提取結(jié)果事半功倍，吉恩特生物的01系列磁珠,，半沉降時間可達15min以上,，磁吸時間僅為15s左右，可為操作者帶來不一樣的磁珠操作體驗,。詳情可參考文章《4個參數(shù)教你鑒別DNA提取磁珠》