核酸提取磁珠/微球的簡論
—吉恩特生物實驗室
生物納米磁珠原本是屬于舶來品,,在各大論文期刊早就有相關(guān)合成的方法,。由于其兼具高分子微球順磁性,廣泛應(yīng)用于核酸提取,、蛋白純化、分子診斷,、靶向治療,、磁成像等領(lǐng)域,只是說它的落地應(yīng)用隨著疫情而火爆,,后繼化學(xué)發(fā)光平臺的推廣,,免疫檢測的升級換代,,漸漸進(jìn)入了大家的視野而被熟知。
常規(guī)的磁珠內(nèi)核為納米級四氧化三鐵,,合成方法有共沉淀法,、微乳液法、熱分解法,、水熱和溶劑法,、溶膠凝膠法等,其中以共沉淀法,、熱分解法,、微乳液法、水熱和溶劑法在四氧化三鐵磁性納米粒子的合成中常用,。不同的論文都標(biāo)榜自己的方法既經(jīng)濟(jì)又快捷,有待論證,。由于國內(nèi)磁珠工業(yè)化生產(chǎn)的時間較晚,目前較好的磁珠多來自于國外品牌,,如:Thermo,安捷倫,,JSR等都是耳熟能詳磁珠廠家,,國內(nèi)公司如為度,、吉恩特、海貍,、博岳等很多企業(yè)正在迎頭趕上進(jìn)行國產(chǎn)替代,。
磁珠的超順磁性:在外加磁場作用下,,其表現(xiàn)為具有很強(qiáng)的順磁性,進(jìn)行磁分離和磁性導(dǎo)向,,撤去磁場時磁性很快消失,不會被磁化,。這一特性,為生物實驗中的快速提純,,自動化分離提供了理論基礎(chǔ)。
磁珠表面功能基團(tuán)的多樣性:通過共聚或化學(xué)改性,,可以實現(xiàn)磁珠表面多種功能性團(tuán)包括硅羥基,、氨基、羧基、醛基,、環(huán)氧基,、Toysl、親和素等等,,不同的基團(tuán)對應(yīng)著不同的偶聯(lián)方式,連接多種生物活性物質(zhì),,如免疫蛋白、生物酶和細(xì)胞等等,,應(yīng)用到不同的領(lǐng)域,。
磁珠的結(jié)構(gòu):
核殼結(jié)構(gòu),即無機(jī)磁性顆粒為核,,聚合物為殼,,這種復(fù)合微球中,無機(jī)磁性微粒被聚合物包埋,形成典型的核殼結(jié)構(gòu),。在早期階段由于生產(chǎn)工藝的限制大部分磁珠都采用這一結(jié)構(gòu),。優(yōu)勢是生產(chǎn)工藝簡單,經(jīng)濟(jì)效率高,。
彌散結(jié)構(gòu),,即無機(jī)磁性顆粒是遍布于在聚合物微球中。現(xiàn)階段制作工藝比較成熟,,多數(shù)國外公司都采用這一模式,,其實這個模式和量子點熒光微球差不多,用微乳液法包起來,。對生產(chǎn)設(shè)備,,控制要求較高。
夾心結(jié)構(gòu),,即內(nèi)外層均為聚合物,,中間為無機(jī)磁性顆粒,這類復(fù)合微球往往是通過對第二層磁球再包裹一層聚合物而制備的,。工藝復(fù)雜,,過程不好控制,殘次率較高,。
磁珠挑選的依據(jù)有哪些呢,?
其實不管你是什么基團(tuán)修飾的磁珠,我們主要看的是它的性能,,作為固相載體,,修飾的基團(tuán)只是為了提取核酸、偶聯(lián)目標(biāo)蛋白等,。諸多品牌,,每一個都說的天花亂墜,到底選擇哪家的產(chǎn)品呢,?
重復(fù)性:批次間穩(wěn)定性,為終端客戶的產(chǎn)品作出有效保證,,一般要求批內(nèi)不大于2%,,批間不大于5% 。
分散性:分散性不好會造成磁珠聚集,,容易沉降,,影響上機(jī)結(jié)果不均勻,CV值差,。
磁通量:顆粒的大小會影響磁通量,,影響磁珠聚集速度,,過低磁吸太慢。
結(jié)合能力/比表面積:磁珠表面基團(tuán)負(fù)載量,,影響生物活性原料用量,,知道表面基團(tuán)的負(fù)載量,才好計算偶聯(lián)應(yīng)該加多少的對應(yīng)蛋白,,活化劑等
表面封閉情況:封閉不好,,存在非特異性吸附,影響本底,,羧基磁珠偶聯(lián)鏈霉親和素,,總會有很高的本底,是不是磁珠本身封閉不好的原因,,很多時候,,也有對鏈霉親和素進(jìn)行預(yù)處理的。
價格:目前來說,,國外價格會貴一些,,國產(chǎn)代替正當(dāng)時,國產(chǎn)磁珠物美價廉,,使下游產(chǎn)品更具競爭優(yōu)勢,。
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