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轉鐵蛋白在細胞培養(yǎng)中的關鍵作用

來源:北京知禾新創(chuàng)生物技術有限公司   2024年07月23日 13:23  

簡介

轉鐵蛋白又稱為血清轉鐵蛋白,、β-1 金屬結合球蛋白、TF,。轉鐵蛋白主要存在于血漿中,,是一種鐵結合血漿糖蛋白,,負責運載由消化管吸收的鐵和由紅細胞降解釋放的鐵,,以三價鐵復合物(Tf-Fe3+)的形式進入骨髓中,,供成熟紅細胞的生成。

人轉鐵蛋白(Human Transferrin)主要在肝臟合成,,在血漿、膽汁,、羊水,、腦脊液,、淋巴液和乳汁等體液中廣泛存在,尤其在血漿中,,作為一種雙葉糖蛋白,,轉鐵蛋白擁有一個N端葉和一個C端葉,每個結構域進一步細分為兩個子結構域,。正是在這些子結構域之間的特定間隙中,,轉鐵蛋白展現出其金屬結合位點,使得每個轉鐵蛋白分子能夠結合兩個鐵離子,,確保了鐵在體內的有效轉運和利用,。


一、機制

轉鐵蛋白以高親和力結合三價鐵(Fe3?),。兩個三價鐵原子以明顯不同的親和力結合轉鐵蛋白,。鐵原子穩(wěn)定常數分別約為1030和1027,在細胞培養(yǎng)基中,,當轉鐵蛋白與鐵的摩爾比大于1時,,大部分鐵都被轉鐵蛋白所結合,因此幾乎沒有游離的鐵離子可以參與自由基化學反應,。然而,,當培養(yǎng)基中的鐵濃度超過轉鐵蛋白的總鐵結合能力(TIBC)時,就會出現游離鐵,。這些未與轉鐵蛋白結合的游離鐵離子可能參與自由基化學反應,,從而增加氧化應激的風險。

在鐵離子的轉運過程中,,兩個負載鐵的轉鐵蛋白分子會與一個轉鐵蛋白受體結合,。這種結合觸發(fā)了轉鐵蛋白及其所攜帶的鐵離子被內吞進入細胞內部的酸性環(huán)境中。隨著細胞內部pH值的降低,,鐵離子被釋放并與細胞內的蛋白質和儲存分子(如鐵蛋白)結合,。而失去鐵離子的轉鐵蛋白(載脂蛋白-轉鐵蛋白)則會通過胞吐作用被釋放回細胞外部,并再次參與鐵離子的轉運循環(huán),。


二,、功能:

轉鐵蛋白是體液中的成分,除了核心功能——鐵的運輸與代謝外,,它還深度參與呼吸,、細胞增殖和免疫系統(tǒng)的調節(jié),并展現出抗菌殺菌的防護能力,。

1,、鐵的儲存與運輸專家:轉鐵蛋白是鐵離子在體內傳輸的關鍵載體,負責將鐵從吸收和儲存的部位運送到紅細胞,以供合成血紅蛋白,,或是輸送到機體其他需鐵的部位,,確保鐵的合理分布與利用。

2,、細胞外的抗氧化衛(wèi)士:轉鐵蛋白在生理條件下與鐵離子緊密結合,,幾乎不留下游離鐵,從而顯著減少了鐵催化自由基生成的風險,,發(fā)揮了強大的抗氧化保護作用,。

3、細胞鐵平衡的精細調控者:轉鐵蛋白向細胞輸送鐵是一個經過受體介導和精細控制的過程,。細胞通過調整轉鐵蛋白受體的表達量,,來調控從外界環(huán)境中攝取的鐵量,維持細胞內鐵離子的平衡,,進而支持細胞的正常生長與增殖,。

4、免疫與抗菌的雙重防御者:轉鐵蛋白不僅是先天免疫系統(tǒng)的重要一員,,通過與鐵離子的結合,,它能夠抑制細菌的生長與存活。此外,,轉鐵蛋白還具備免疫調節(jié)功能,,如抑制GM-CSF,參與細胞調節(jié),,為機體提供多層次的防御,。

 

三、來源

轉鐵蛋白是生長因子,,所以幾乎所有細胞株在無血清培養(yǎng)時,,都需要添加轉鐵蛋白以確保細胞的生長和增殖,并且不同類型的細胞對轉鐵蛋白結合物的反應不同,,結果會分化成不同的細胞,。目前轉鐵蛋白主要有以下幾個來源:

牛血清、人血清以及基因重組技術生產的轉鐵蛋白,。

1,、牛轉鐵蛋白(Bovine Transferrin, BTF)

BTF是從牛血清中分離純化得到的轉鐵蛋白。

由于牛血清的易獲取性和相對較低的成本,,BTF在實驗室研究中被廣泛使用,。

BTF與人轉鐵蛋白在結構和功能上有一定的相似性,但在一些特定應用中可能存在差異,。

從動物中提取的轉鐵蛋白具有安全性差和批間差大等缺陷,,尤其是將提取的轉鐵蛋白添加于細胞培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基中時,,可能會將病原體帶入細胞中,污染細胞,。

2,、人轉鐵蛋白(Human Transferrin, HTF)

HTF是從人血清中分離純化得到的轉鐵蛋白。

HTF在醫(yī)療和生物技術領域的應用中具有很高的價值,,尤其是在需要高度特異性和生物相容性的應用中。

但從人血中提取存在困難,,在面臨公共衛(wèi)生事件時尤其如此,;有感染肝炎病毒和艾滋病病毒等的危險,也限制了血漿來源的轉鐵蛋白的應用,;而且轉鐵蛋白在同一種動物中表現出多態(tài)性,,分子存在大小差異,這也可能導致批次間不穩(wěn)定,。

3,、基因重組轉鐵蛋白(Recombinant Human Transferrin,rHTF)

rHTF基因重組技術通過生物發(fā)酵等方法在體外生產轉鐵蛋白,。

這種方法可以生產大量高純度的轉鐵蛋白,,且不受原材料來源的限制。

重組的人轉鐵蛋白避免了病原體污染的可能性,,因此無血清培養(yǎng)基中更應該添加重組的人轉鐵蛋白,。利用基因工程技術讓人轉鐵蛋白基因在宿主中高效表達,既能大量獲得重組轉鐵蛋白,,又能克服從血清中獲取的轉鐵蛋白的種種缺點,。

 

四、分類

在不同研究中,,按其含鐵數目,,分鐵飽和轉鐵蛋白(全鐵)、單鐵轉鐵蛋白,、脫鐵轉鐵蛋白,。

培養(yǎng)基中應該添全鐵轉鐵蛋白還是脫鐵轉鐵蛋白,要根據不同培養(yǎng)基的情況進行選擇,,當培養(yǎng)基中不含鐵或鐵含量較低時,,選擇添加全鐵轉鐵蛋白;當培養(yǎng)基中富含鐵時,,選擇脫鐵轉鐵蛋白,。

 

知禾特色

知禾提供兩款重組人轉鐵蛋白產品,其一為全鐵轉鐵蛋白,,即飽和鐵狀態(tài),,除發(fā)揮轉鐵作用外,,自身即可作為細胞的鐵源,無需在培養(yǎng)基中添加外源性鐵,;其二為脫鐵轉鐵蛋白,,適用于自身富鐵的培養(yǎng)基。

這兩款產品都來源于畢赤酵母,,不含有動物源成分,,無任何血源性病毒感染風險,規(guī)?;l(fā)酵生產,,批間穩(wěn)定性高。



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