活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng),,逐級擴大培養(yǎng)得到純而壯的培養(yǎng)物,,即獲得活力旺盛的,、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復壯過程,因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同,,所以要活化,,讓菌種逐漸適應培養(yǎng)環(huán)境。那么你知道細菌活化的操作流程是什么嗎,?讓我們一起來看看吧,!
1. 在無菌操作下,用無菌微量吸管,,從已溶解的管中吸取50μL(或1-2滴)的菌液,,滴入固態(tài)培養(yǎng)基(培養(yǎng)基編號及溫度示于菌株訂購單)某一邊緣附近,以劃線法接種于培養(yǎng)基,。
2. 將接種好的培養(yǎng)基置于溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
3. 在無菌環(huán)境下,,以沾有75%酒精的棉花擦拭外管,,在火焰上加熱外管之尖端,。滴數(shù)滴無菌水于加熱處,使外管破裂,,再以硬棒敲破尖端,。取出隔熱纖維紙和內(nèi)管,以滅菌過的鑷子取出內(nèi)管之棉塞,。
4. (a)適用于細菌用無菌吸管,,吸取0.3-0.5mL之液體培養(yǎng)基,滴入內(nèi)管內(nèi),,并輕微震蕩(可用該吸管協(xié)助),,直到均勻懸浮。
(b)適用于霉菌,、酵母菌用無菌吸管,,吸取0.3-0.5mL無菌水,滴入內(nèi)管內(nèi),,待干燥粉末溶解后,,以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內(nèi),輕微震蕩使其均勻后,,靜置30至60分鐘,。
5. 取0.1-0.2mL之菌體懸浮液于平板培養(yǎng)基上,做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋,,用無菌L型玻棒均勻涂抹,,以檢驗菌種之純度及活化情形,而剩余的菌體則全部移入液體培養(yǎng)基內(nèi),,并依溫度培養(yǎng)之,。
6. 某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,遲滯期(lagperiod)較長,,必須等培養(yǎng)二倍時間后才能長出,,且再經(jīng)過一、二次繼代培養(yǎng)(Subculture)后才能正常生長,。經(jīng)過以上的努力后仍培養(yǎng)失敗,,才視為不能活化。
7. 未開封之冷凍干燥管,,請冷藏于4℃冰箱,,切勿冷凍保存。
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