牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒說明書
本試劑僅供研究使用 標本：體液，牛初乳,，細胞上清液

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒試驗原理：
TGF-β1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知TGF-β1濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將TGF-β1和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中TGF-β1的濃度呈比例關系,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：400pmol/L 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗TGF-β1抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200ul,、500ul、1000ul,。
振蕩器及磁力攪拌器等,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值,。
加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行：

400 pmol/L （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
200 pmol/L （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pmol/L （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pmol/L （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pmol/L （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 pmol/L （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pmol/L （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照,。
取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果,。
在450nm波長處測定各孔的OD值,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒建議使用的實驗方案

標準品濃度（pmol/L）
A 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 12.5 12.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

牛轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1（TGF-β1）ELISA 試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的TGF-β1標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線，樣品的TGF-β1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。

3,、檢測值范圍：0-400pmol/L

4、敏感度： 1.0 pmol/L