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與典同行|2020中國藥典增補(bǔ)版應(yīng)對(duì)方案——氨基酸篇

來源:合肥森譜科學(xué)儀器有限公司   2024年06月12日 18:21  


2023年10月,國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《中華人民共和國藥典》(2020年版)第一增補(bǔ)本,已于今年3月12日正式實(shí)施,。其中收載新增品種47個(gè),,通用技術(shù)要求,、指導(dǎo)原則6個(gè),;修訂或訂正品種646個(gè),、通用技術(shù)要求15個(gè),,以期更快更好地滿足藥品生產(chǎn)檢驗(yàn),、監(jiān)督管理等工作的需要,。

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截圖來源:國家藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站


為更好地幫助客戶根據(jù)藥典新增通則和指導(dǎo)原則,開展相關(guān)檢測(cè)方法擴(kuò)項(xiàng)和升級(jí),,賽默飛針對(duì)藥典的新增內(nèi)容,,特推出2020中國藥典增補(bǔ)版應(yīng)對(duì)方案專題。第一期我們聚焦增補(bǔ)本(四部)新增的“9120氨基酸分析指導(dǎo)原則”,。


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氨基酸作為構(gòu)成人體所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì),,通常紫外吸收較弱,直接使用紫外方法檢測(cè)干擾較大,,靈敏度低,。故藥典中將通過合適的衍生試劑經(jīng)衍生化增加生色團(tuán)后,再使用液相色譜結(jié)合紫外檢測(cè)等手段作為藥品中氨基酸測(cè)定的常用方法,。目前氨基酸衍生化主要分為柱前和柱后衍生,,柱前衍生又有離線和在線衍生。藥典中常用的衍生化試劑主要有異硫氰酸苯酯(PITC),、氨基甲酸酯(AQC),、鄰苯二甲醛(OPA)、芴甲(FMOC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)等,,不同的衍生化試劑在反應(yīng)原理,、效率及穩(wěn)定性等方面不盡相同。

最新公布的2020版中國藥典第一增補(bǔ)本(四部),,新增的9120氨基酸分析指導(dǎo)原則,,除了對(duì)分析方法進(jìn)行了一定優(yōu)化外,方法三——柱前OPA和FMOC衍生氨基酸測(cè)定法中提到了自動(dòng)化柱前衍生法,。





自動(dòng)化在線衍生-紫外檢測(cè)法


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賽默飛Vanquish液相色譜的自動(dòng)進(jìn)樣器配合變色龍軟件(Chromeleon),,可提供用戶自定義進(jìn)樣程序(User-Defined Program, UDP),從而替代人工,,實(shí)現(xiàn)定制化,、自動(dòng)化的在線氨基酸衍生操作,契合2020藥典增補(bǔ)9120氨基酸指導(dǎo)原則中“衍生化操作也可由具有自動(dòng)衍生功能的進(jìn)樣器完成”的需求,。

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Vanquish 液相色譜和自動(dòng)進(jìn)樣器

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在線針內(nèi)衍生程序示例

(Position R:A2:硼酸鹽緩沖液,;Position R:A3:OPA溶液;Position R:A4:FMOC溶液,;Position R:A5:進(jìn)樣稀釋液)(點(diǎn)擊查看大圖)

方法結(jié)合OPA和FMOC衍生試劑,,Acclaim 120 C18色譜柱(PN: 059148)和Vanquish自動(dòng)進(jìn)樣器在線針內(nèi)衍生功能,可以輕松實(shí)現(xiàn)氨基酸的在線自動(dòng)化衍生,、分析,。無需手動(dòng)衍生,節(jié)省了試劑消耗和人力成本,,同時(shí)在線衍生程序編輯智能,、簡(jiǎn)便,,大幅提升了氨基酸檢測(cè)效率。

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自動(dòng)在線衍生-紫外檢測(cè)法分析氨基酸

(點(diǎn)擊查看大圖)

另外,,指導(dǎo)原則方法三中提到一級(jí)和二級(jí)氨基酸衍生物“經(jīng)反相高效液相色譜分離后需用紫外光檢測(cè)器在338nm和262nm波長處分別檢測(cè)”,。基于雙波長檢測(cè)要求,,客戶通常會(huì)選擇二極管陣列檢測(cè)器,,或單通道紫外檢測(cè)器結(jié)合波長切換等方法,而賽默飛Vanquish Core 紫外檢測(cè)器標(biāo)配雙檢測(cè)通道特點(diǎn),,無需波長切換即可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)波長的同時(shí)檢測(cè),,結(jié)果優(yōu)于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)高效液相色譜方法的檢測(cè)靈敏度。





非衍生-電霧式檢測(cè)法


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賽默飛電霧式檢測(cè)器(Charged Aerosol Detector,,CAD)作為通用型檢測(cè)領(lǐng)域的典型代表,,憑借其在靈敏度、重現(xiàn)性以及響應(yīng)一致性等方面的顯著優(yōu)勢(shì)而備受用戶關(guān)注和青睞,,成為國內(nèi)外各大藥企和科研院所在研發(fā)和質(zhì)量控制等應(yīng)用方面的一大利器。而基于大部分氨基酸紫外吸收較弱的特點(diǎn),,CAD又為氨基酸檢測(cè),,開辟了一條衍生方法以外的檢測(cè)捷徑。

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Vanquish 電霧式檢測(cè)器(CAD)


CAD檢測(cè)器結(jié)合賽默飛Hypercarb多孔石墨化碳色譜柱(PN:35005-154630)在極性化合物分析方面的優(yōu)勢(shì),,可以實(shí)現(xiàn)無需衍生的氨基酸直接分析,,大大簡(jiǎn)化了前處理步驟,也很好的規(guī)避了指導(dǎo)原則中提及的關(guān)于“二級(jí)氨基酸衍生重復(fù)性較差,,OPA-氨基酸衍生物不穩(wěn)定”等實(shí)際問題,。兩種方法在重現(xiàn)性和靈敏度方面的表現(xiàn)基本相當(dāng)。

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非衍生-電霧式檢測(cè)法直接分析氨基酸

(點(diǎn)擊查看大圖)




總  結(jié)

賽默飛Vanquish液相色譜平臺(tái),,所具備的多種類型的檢測(cè)器和靈活可定制的程序軟件,,結(jié)合兼具合規(guī)和創(chuàng)新的分析色譜柱,既可以滿足自動(dòng)化在線氨基酸衍生分析要求,,又能拓展無需衍生的CAD直接分析氨基酸方法,。在滿足藥典第一增補(bǔ)本(四部)中的新增指導(dǎo)原則的同時(shí),為相關(guān)制藥及食品等行業(yè)客戶在氨基酸檢測(cè)方面提供了更多更新穎的檢測(cè)思路和分析手段,。



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