食品合成著色劑,，也稱為合成食用色素,，是通過化學(xué)合成工藝生產(chǎn)的，用于給食品著色的物質(zhì),。這些著色劑能增強食品的色彩,，提高食品的感官吸引力，使食品更加誘人,。合成食用色素的使用受到嚴格的法規(guī)和標準的約束,。在國內(nèi)，食品添加劑的使用需遵循《食品安全法》及相關(guān)國家標準,，?？萍瘓F依據(jù)GB 5009.35-2023《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》，采用WAX混合型弱陰離子固相萃取柱,，整理歸納了全套的解決方案,，適用于多基質(zhì)的檢測應(yīng)用,。

固相萃取：Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀

氮氣吹干裝置：Auto EVA80高通量全自動平行濃縮儀

高效液相色譜：（HPLC）Agilent 1260

固相萃取柱：RayCure WAX ,，150mg/6mL,，30支/盒（RC-204-72823N）

2.1 標準工作曲線配置

分別取濃度為50μg/mL的混合標準中間液4μL、10μL,、20μL,、40μL、100μL于2mL進樣瓶中,，用水稀釋至1mL,，搖勻，得到標準系列工作液,。濃度分別為0.2ug/mL,、0.5ug/ml、1.0ug/ml,、2.0ug/ml,、5.0ug/ml。

2.2 樣品提取

準確稱取試樣2g（精確至0.001g）,，置于50 mL具塞離心管中,，先加入適量水（2 mL-5 mL），50 ℃水浴加熱混勻樣品,，加入25mL乙醇氨水溶液，渦旋1min,，50℃超聲或振搖（速率≥250r/min）提取20min,，8000r/min離心5 min，取上清液置于50mL容量瓶中,，每次加入約5 mL-10 mL乙醇氨水溶液重復(fù)提取操作至上清液無明顯顏色,，離心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL,，即得提取液,。準確吸取提取液10mL，50℃氮氣濃縮至3mL左右,，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解,，作為待凈化液。

2.3 固相萃取凈化條件

(1) 活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化固相萃取柱

(2) 上樣：活化后立即將提取后的待凈化液以2s-3s/滴的流速加載固相萃取柱上

(3) 淋洗：依次用6mL2%甲酸水溶液和6mL甲醇淋洗合成著色劑專用固相萃取柱,，棄去淋洗液

(4) 吹干：抽干柱體

(5) 洗脫：用6mL2%-5%氨化甲醇溶液洗脫,，分兩次加入，每次3mL,，流速低于2s-3s/滴,，收集洗脫液

(6) 氮吹：于50℃氮氣濃縮至近干

(7) 復(fù)溶：準確加入2mLpH=9的乙酸銨溶液溶解。溶液用0.45μm水系針筒過濾器過濾，棄去2-5滴初濾液,，收集后續(xù)濾液作為待測液

3.1色譜柱：C18柱,，4.6mm×250mm，5μm,，或同等性能色譜柱

3.2 進樣量：10μL

3.3 柱溫：30 ℃

3.4 二極管陣列檢測器波長范圍：400nm-800nm,，檢測波長：

415nm(檸檬黃、喹黃)

520nm(新紅,、莧菜紅,、胭脂紅、日落黃,、誘惑紅,、酸性紅和赤蘚紅)

610nm(靛藍、亮藍)

3.5 參考洗脫梯度見表1,，其中流動相A為20mmol/L乙酸銨溶液,，流動相B為甲醇

表1 參考洗脫梯度表

3.6 譜圖

圖3為415nm，520nm,，610nm波長下,，11種合成著色劑標準品（1μg/mL）譜圖

為了驗證該方法的回收率，本實驗向冰紅茶飲料樣品（2g）中加入上述11種食品中合成著色劑標準品（200μL,，50μg/mL）,，進行加標回收驗證。測試結(jié)果如下表所示,。11種食品中合成著色劑的回收率在71.96-98.94%之間,，RSD 值在0.39-6.15%之間。

表2 冰紅茶飲料中11種合成著色劑的

加標回收率及RSD值（%）