雞網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒抗原（REV- Ag）酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
                                                                                                                                          96T 
 
使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）表達,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒抗原（REV -Ag）表達。
用純化的抗體包被微孔板,，制成固相抗體，可與樣品中網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）相結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗體結(jié)合,，形
成抗體-抗原-抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)
化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD
值）,，與CUTOFF 值相比較,，從而判定標本中雞網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒抗原（REV -Ag）
的存在與否,。
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  陽性對照  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12孔×8 條  9  陰性對照  0.5 ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 張    
6  顯色劑 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 個
標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟
1.   編號：將樣品對應微孔按序編號,，每板應設陰性對照 2 孔,、陽性對照2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）
 
 
2.   加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50µl ,。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl ,，然后再加待測樣品 10µl 。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不
觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，
3.   溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。      
4.   配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此
重復5 次,，拍干,。
6.   加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外,。  
7.   溫育：操作同 3,。
8.   洗滌：操作同 5。
9.   顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。  測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行,。
 
 
操作程序總結(jié)：
 
 
 
 
計算和結(jié)果判定：
    試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.10 
    臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
    陰性判定：樣品OD 值<  臨界值（CUT  OFF）者為網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）陰性
    陽性判定：樣品OD 值≥  臨界值（CUT  OFF）者為網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）陽性
,。  
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存,。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm 
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月