細胞凍存是細胞培養(yǎng),、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段,。在細胞建株和建系中,,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,,雜交瘤細胞,、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,,細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導致實驗失敗,,如果沒有原始細胞的凍存,,則因為上述的意外而前功盡棄。通用細胞凍存液可用于培養(yǎng)細胞的凍存,。
通用細胞凍存液的使用步驟:
1,、培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長晚期,顯微鏡觀察其外觀,、形態(tài),、有無污染等,取狀態(tài)良好的細胞進行凍存操作,。
2,、離心,,棄上清。
3,、加入適量的通用細胞凍存液,,重懸細胞,使細胞濃度達到1~10×106/ml,,置于凍存管中,,密閉、不要擰的太緊,,避免彎曲變形,。
4、一般遵循1℃/min的速率進行冷凍,。亦可采用4℃ 20min,,-20℃ 30min,-70℃過夜,,然后置于液氮罐中長期存儲,。
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