1,、樣品厚度的影響 當(dāng)進(jìn)行相差觀察時(shí)，樣品的厚度應(yīng)該為5μm或者更薄,，當(dāng)采用較厚的樣品時(shí)，樣品的上層是很清楚的,，深層則會(huì)模糊不清并且會(huì)產(chǎn)生相位移干擾及光的散射干擾,。 　　
2、蓋玻片和載玻片的影響 樣品一定要蓋上蓋上蓋玻片,，否則環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán)很難重合,。相差觀察對(duì)載玻片和蓋玻片的玻璃質(zhì)量也有較高的要求，當(dāng)有劃痕,，厚薄不均或凹凸不平時(shí)會(huì)產(chǎn)生亮環(huán)歪斜及相位干擾,。另外玻片過(guò)厚或過(guò)薄時(shí)會(huì)使環(huán)狀光闌亮環(huán)變大或變小?！?br />3,、暈輪和漸暗效應(yīng) 在相差顯微鏡成象過(guò)程中，某一結(jié)構(gòu)由于相位的延遲而變暗時(shí),，并不是光的損失,，而是光在象平面上重新分配的結(jié)果。因此在黑暗區(qū)域明顯消失的光會(huì)在較暗物體的周?chē)霈F(xiàn)一個(gè)明亮的暈輪,。這是相差顯微鏡的缺點(diǎn),，它妨礙了精細(xì)結(jié)構(gòu)的觀察，當(dāng)環(huán)狀光闌很窄時(shí)暈輪現(xiàn)象更為嚴(yán)重,。相差顯微鏡的另一個(gè)現(xiàn)象是漸暗效應(yīng),，指相差觀察相位延遲相同的較大區(qū)域時(shí)，該區(qū)域邊緣會(huì)出現(xiàn)反差下降,。 　

4,、相位倒轉(zhuǎn) 當(dāng)n’<n或n’>n時(shí)得到象的明暗反差正好相反，稱(chēng)為相位倒轉(zhuǎn),。當(dāng)相位差δ=0時(shí)是無(wú)法識(shí)別的,，隨著δ的增大反差變大，當(dāng)δ繼續(xù)增大到某一值后會(huì)出現(xiàn)相位倒轉(zhuǎn),。用90%高吸光值（高反差）物鏡時(shí),，這個(gè)轉(zhuǎn)變值約為0.55λ，用70%標(biāo)準(zhǔn)吸光值的物鏡時(shí)約為0.33λ,。較高吸光值的物鏡應(yīng)該用于分辨較小的光程差,。