牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用, 接下來為大家介紹其中兩種作用,。
牛血清白蛋白測定蛋白濃度:
按50:1配置BCA工作液,。10ulC液(蛋白標(biāo)準(zhǔn))+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液,。
再分別以0,、1,、2,、4,、8,、12,、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中,,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品,。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,,室溫放置2小時,。用酶標(biāo)儀測定蛋白濃度:測定A562,依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度,。
牛血清白蛋白SDS-PAGE電泳
1,、制膠:按比例配制分離膠,,緩緩地?fù)u動溶液,使激活劑混合均勻,,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃J中,,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進入凝膠溶液中,,靜置40min,。
同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時不要過于劇烈以免引入過多地氧氣,。
吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分,,連續(xù)平穩(wěn)的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,,靜制60min以上以保證聚合,。
2、預(yù)電泳:將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,,小心拔去梳子,,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預(yù)電泳20-30min。
3,、樣品準(zhǔn)備:首先計算上樣體積,,然后按樣品上樣buffer=4:1的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,,冰上5分鐘,。
4、加樣:預(yù)電泳后依次加入標(biāo)準(zhǔn)品(Marker)和待分析樣品,。(加樣時間要盡量短,,以免樣品擴散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng),。)每個泳道加5ul ,。
5、電泳:加樣完畢,,選擇80V恒壓進行電泳,,電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿到達(dá)兩膠交界處(約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,,電泳直至溴酚藍(lán)染料前沿下至凝膠末端處,,即停止電泳(約1小時20分鐘)。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任,。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),,不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體,、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任,。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。