手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
1,、細胞密度對電轉(zhuǎn)的影響
細胞系電轉(zhuǎn)的細胞密度最好在0.5M-2.0M/20ul，或2.5M-10M/100ul. 常用1M/20ul. PBMC直徑更小,，細胞密度一般為1M-5M/20ul, 或5M-25M/100ul,。細胞密度越高可以增加細胞間電流輔助，從而增加細胞的有效電轉(zhuǎn)面積,。密度高時電壓需要稍微調(diào)高一些,，所以電轉(zhuǎn)時細胞密度根據(jù)實驗需要選定后盡量不要變化。
需要特別注意的地方：一個樣品加進電擊管后,，不要等候,，馬上進行電轉(zhuǎn)，完成后再處理下一個樣品,，不要把一批樣品全部加樣完成后再一起電轉(zhuǎn),。等候時間過長，細胞沉降也會導(dǎo)致電擊管內(nèi)上下細胞密度不均勻而降低電轉(zhuǎn)效率,。電轉(zhuǎn)完成后細胞可以馬上取出培養(yǎng),，也可以等全部樣品處理完畢再取出培養(yǎng)。
2,、細胞聚團對電轉(zhuǎn)的影響
當(dāng)細胞聚團時，其中只有一側(cè)細胞可以被電轉(zhuǎn),，中間和另一側(cè)細胞不能被電轉(zhuǎn),，降低電轉(zhuǎn)效率。所以消化細胞過程中注意細胞不要成團,。
3,、溫度對電轉(zhuǎn)的影響
溫度對電轉(zhuǎn)影響也很大,。一般室溫（23度）適宜進行電轉(zhuǎn)實驗。溫度越低,，需要電壓越高,。4度電轉(zhuǎn)比室溫23度電轉(zhuǎn)大概需要增加3%到5%的電壓。所以為保證電轉(zhuǎn)實驗結(jié)果可重復(fù)性,，需要將每次的電轉(zhuǎn)溫度保持一致,。
4、DNA質(zhì)量對電轉(zhuǎn)的影響
DNA越純凈,，越有利于電轉(zhuǎn),。DNA中雜質(zhì)較多時，細胞毒性大,，非常不利于電轉(zhuǎn),。市場上在售的品牌質(zhì)粒提取試劑盒一般都可以。DNA加得比較多時,，電轉(zhuǎn)效率呈線性遞增,。但是電轉(zhuǎn)時DNA加的過高也會產(chǎn)生細胞毒性，電壓需要稍微下調(diào),。所以DNA濃度應(yīng)根據(jù)實驗需要相應(yīng)調(diào)整,，濃度范圍一般在10ug/ml-200ug/ml。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任,。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息,，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,，并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問題,，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。
采購中心